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    北京华新康信对Brainbitsllc常见问题进行解答

    发布时间: 2021-06-18  点击次数: 659次

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    Brainbitsllc常见问题:

     

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    1. 混合 B27 补充剂 / Neurobasal 培养基 / 0.5 mM 谷氨酰胺后,培养基能稳定多久?

     

    我们在 4 o C 的黑暗中储存长达 6 个月。

     

    2. 我需要多久补充一次 Neurobasal/B27/谷氨酰胺?

     

    我们每 3 4 天更换 1/2 培养基,但这部分取决于细胞密度。参见 INVITROGEN (LTI) FOCUS 16:6。如果细胞密度高于 500/mm 2  ,则每 2 天更换 1/2

     

    3. 我可以用一些 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺(无谷氨酸盐)来稀释 BrainBits 附带的 B27/Neurobasal + 谷氨酰胺 + 谷氨酸盐,比如 1:2 稀释,细胞仍然生长吗?

     

    是的,但也不是。请参阅上面引用的 FOCUS 文章。

     

    4. 您通常在培养第 4 天之前向 Neurobasal/B27 添加 25 uM 谷氨酸盐。谷氨酸的目的是什么?

     

    它帮助海马神经元发芽并促进活力。

     

    5. 不加谷氨酸有问题吗?

     

    4 DIV 时,您的存活率将降低约 30%

     

    6. 我需要一些培养基或试剂来维持培养物吗?

     

    您将需要您选择的镀膜玻璃或塑料基板。该订单包括足够的培养基来开始培养并维持 4 5 天。除此之外,您将需要更多培养基,我们可提供完整的即用型 NbActv1 配方,也可通过 Invitrogen 单独购买。

     

    7. 我应该用抗生素/抗真菌剂补充 B27/Neurobasal 培养基吗?例如:pen/strep/fungizone 或庆大霉素?

     

    我们通常在不使用抗菌抗生素和抗真菌剂的情况下进行培养,并取得了良好的效果。这具有三个优点:

     

    首先,当出现污染时,更容易确定污染源。其次,如果您使用抗生素,当您感染时,就更难摆脱。第三,抗生素已被证明可以激活神经元中的癫痫样爆发活动。然而,我们有时会在庆大霉素 (10 ug/ml) 中开始培养,并在细胞粘附后一小时后将其冲洗干净。

     

    休眠®

    *HibernateNeurobasal B27 仅用于研究目的,由 Invitrogen Corporation 制造。HibernateNeurobasal B27 Invitrogen Corporation 的商标。

     

    1. 我可以使用 Hibernate 进行木瓜蛋白酶治疗吗?

     

    BrainBits LLC 提供 5 ml 不含 B27 Hibernate-Ca,用于在 15 ml 无菌离心管中最佳分离 BrainBits 与木瓜蛋白酶。加入木瓜蛋白酶 (Worthington) 后,在 37 o C 下溶解10 分钟。您需要使用 0.2 µm 过滤器对溶液进行消毒。

     

    2. 你是否总是在 Hibernate 中添加 B27 谷氨酰胺,或者它是否仍然在 Hibernate 中保持细胞存活?

     

    几乎总是。请参见 Brewer and Price (1996) PM:8856709 的图 1 37 0 C 环境 CO2 中,Neurobasal/B27/gln 中的 LD50 24 小时,休眠/B27/gln 中为 >3 天。

     

    3. 我们可以提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate 吗?

     

    是的,事实上我们有几个客户提出了这个要求。因此,我们可以以相同的价格提供不含葡萄糖和丙酮酸的 Hibernate A。您只需要告诉我们您是希望用 NaCl 将渗透压调整到正常水平还是低于平常水平,以便您可以自行调整。

     

    4.  Hibernate 的其他用途包括:

     

    转基因小鼠基因分型过程中的大脑储存

     

    将脑组织运送给合作者

    基质

    1. 我不经常使用聚-D-赖氨酸。我制作了 5 毫克/毫升的 (100x) 储备溶液并将其等分到小冷冻管中。我可以将原液冷冻保存多久,并且仍然可以与海马细胞一起使用?

     

    大概是永远。不要储存在聚丙烯管中。聚苯乙烯或 PET 更好。解冻时一定要搅拌均匀。

     

    2. 一些研究人员使用聚乙烯亚胺代替聚赖氨酸。一个比另一个有优势吗?

     

    PEI 比聚赖氨酸便宜。我们使用 PEI 并没有取得多大成功,但 Mark Mattson 在开始在 Neurobasal/10% 血清中培养后一直使用它。报告表明神经元存活率或尖峰率没有显着差异。

     

    Soussou WVYoon GJBrinton RDBerger TW (2007) 在表面处理的多电极阵列上培养的海马神经元的神经元网络形态和电生理学。IEEE 跨生物医学工程 541309-1320。 电话:17605362

     

    Brewer GJ, Cotman CW (1989) 海马神经元在低密度限定培养基中的存活和生长:夹心培养技术或低氧的优势。大脑研究 494:65-74。电话:2765923

     

    3.  BrainBits 神经元越来越多地生长为细胞簇或团块,而不是孤立的。怎么了?

     

    这意味着细胞与自身的粘附比与基底更紧密。最可能的问题是基材准备不充分。将您的方案与推荐的聚赖氨酸制备和基材涂层进行比较。

     

    4. 关于聚-L-赖氨酸与聚-D-赖氨酸,我假设使用聚-D-赖氨酸,因为如果它分解成赖氨酸,细胞就不能使用d赖氨酸。有什么道理吗?

     

    这就是理论。在一些早期研究 (Brain Res. 494:65(1989)) 中,我们发现差别不大。

     

     

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