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    Toxin三型副鸡禽杆菌对SPF鸡的致病力试验方法

    发布时间: 2024-02-22  点击次数: 105次

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    三型副鸡禽杆菌对SPF鸡的致病力试验方法

    112 培养基 半合成培养基、鸡血清鸡肉汤和鸡

    血清鸡肉汤琼脂。参照冯文达等[9]的方法制备。

    113 试验用鸡 12035日龄 SPF ‚购自北

    京实验动物中心‚在北京所负压隔离器内饲养至57

    日龄。

    12 方法

    121 细菌培养 取冻干卵黄‚用普通肉汤稀释

    后‚接种鸡血清鸡肉汤琼脂‚于体积分数为5 CO2

    37℃培养24h48h‚挑取典型菌落接种鸡血清

    鸡肉汤‚在37℃培养10h12hB 型)和18 h

    24hA 型和 C 型)‚分装保存于-80 ℃冰柜的同

    时‚进行活菌计数和纯粹性检验[10]。

    122 试验分组 将120只试验用鸡随机分成3

    组‚A 型菌组40只鸡‚B 型菌组35只鸡‚C 型菌组

    45只鸡(表1)。

    123 攻毒 从-80℃取出纯粹性检验合格活菌

    计数过的 ABC 型菌液‚按照保存前计数的活菌数

    用半合成培养基进行稀释‚每个剂量注射5只鸡‚

    只鸡眶下窦内注射02mL。所含 cfu02mL 如表

    1。攻毒后24h 开始逐只检查每只鸡的发病情况‚

    每天检查1‚共检查7d10]。

    124 细菌分离 在攻毒后96h‚攻毒剂量最小组

    15×104 cfu02mL)各随机取2只鸡‚进行细菌

    分离[6-8‚粗提 DNA‚进行 PCR9‚11-12]。

    2 结果

    21 细菌培养和活菌计数

    B 型副鸡禽杆菌 BJ-05株在鸡血清鸡肉汤培养

    基 中培养10h ‚菌液浑浊‚计数结果为10×

    108cfumLA 型副鸡禽杆菌 C-Hpg8CVCC254)在

    鸡血清鸡肉汤培养基中培养24h ‚可见细菌明显

    生长‚计数结果为02×108cfumL668株在鸡血清

    鸡肉汤培养基中培养20h ‚菌液较浑浊‚计数结

    果为4×108cfumL。纯检结果均未发现有其他细

    菌生长。

    22 攻毒鸡只发病情况

    攻毒后24h168h‚每天逐只检查鸡只的发病

    情况。攻毒后24h‚3大组鸡只大部分发病‚表现为

    眶下窦肿胀‚流鼻汁、有少数鸡只面部水肿。攻毒后

    48h‚ A 30×104cfu02mL 组和 B 100×

    104cfu02mL 组各有1只鸡没有发病外‚其余118

    只鸡均发病‚且大部分鸡只呈现明显的鸡传染性鼻

    炎临床症状‚眶下窦明显肿胀‚鼻孔周围黏附饲料‚

    面部水肿明显‚公鸡肉垂水肿。攻毒后72 h‚A

    30×104cfu02mL 组的5只鸡全部发病‚其余基

    本与攻毒后48h 相同。攻毒后第4天至第5‚

    病鸡数和临床症状与攻毒后72h 相同。至第6‚

    部分发病鸡只临床症状减轻至消失‚攻毒后第7‚

    除少数鸡只外‚大部分鸡只临床症状消失。攻毒后

    24h72h 的详细发病情况见表2。表2中的"

    眶下窦肿胀明显‚面部水肿‚鼻汁多‚有的鸡只眼睛

    一过性失明‚公鸡肉垂水肿。+++"表示眶下窦

    肿胀较明显‚鼻汁较多;++"表示眶下窦肿胀‚

    鼻汁;“+"表示用手挤压时流出鼻汁。

    23 细菌分离和 PCR 鉴定

    A 型、B 型和 C 型各2只鸡的眶下窦均分离

    到纯的副鸡禽杆菌‚将它们接种普通肉汤和普通琼

    脂‚37℃培养96h‚均未见细菌生长。用6个分离株

    的粗提 DNA 进行 PCR‚结果66阳性‚与标准阳性

    对照大小(05kb)一致(图1

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