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    alpco试剂常见问题与解答

    发布时间: 2023-02-15  点击次数: 509次

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    alpco常见问题与解答

    问:我购买的试剂盒可以使用什么样的样品类型?

    A.每种类型的试剂盒都经过了方案中所示样品类型的验证。所有其他样本类型都必须经过内部验证。请联系ALPCO的产品支持团队,了解产品用户可能进行的其他样本类型测试的更多信息。

    问:该试剂盒是否与其他物种交叉反应?

    A.每种试剂盒均已针对方案中所示的物种进行了验证。尽管可能存在交叉反应性,但需要在内部对其他物种进行验证。请联系ALPCO的产品支持团队,了解产品用户可能进行的物种验证的更多信息。

    问:我运行了多少标准和控制?

    A.每个试剂盒至少包括一套标准品(或一小瓶待稀释的标准品),在大多数情况下包括一个或两个对照品。每次进行分析时,必须运行标准品和对照品(如果包括),强烈建议运行所有标准品/对照品/和样品一式两份。

    问:我可以使用其他试剂盒或批次的试剂吗?

    答:没有。不要用其他套件或批次的部件替代。

    问:我可以修改培养时间或温度吗?

    答:没有。请不要偏离协议。

    问:我可以使用过期的工具包吗?

    答:没有。如果试剂盒超过了试剂盒标签上规定的有效期,则不应使用该试剂盒。

    问:我可以使用放置在室温下的试剂盒吗?

    A.请确保试剂盒及其组件按照试剂盒插页中的指示存放。有关试剂盒在室温下稳定性的更多信息,请联系ALPCO的产品支持团队。

    问:我可以跳过在化验中运行对照吗?

    答:否。如果提供了对照品,请务必在每次分析中运行对照品。对照品的浓度应在分析证书规定的范围内。

    问:我可以用多通道移液管清洗盘子吗?

    答:我们不建议使用多通道移液管。必须用足够且相等的力分配冲洗缓冲液,以正确冲洗井。我们建议使用Statmatic清洗喷嘴tricontinent或自动洗板机。请参阅网站资源"部分的学习中心"选项卡,获取显示正确洗涤技术的视频,或单击此处。

    问:有必要对我的样品进行布局吗?

    答:非常重要的是,要知道你的标准品、对照品和样品在板上的位置,以便正确生成结果。单击此处获取可下载的图版。这也有助于在滗析过程中,在板条松动的情况下,在板上标记板条(在两端使用小标签)。

    问:为什么洗涤步骤如此重要?

    A.正确清洗平板是运行任何成功ELISA的一个非常关键和重要的方面。洗盘子时要保持一致。过快或过慢地清洗平板、不全清洗或抽吸以及让孔保持干燥都是影响测定精度的因素。我们不建议为此目的使用多通道移液管。多通道移液管没有施加足够的压力来底去除未结合的材料,这将导致更高的背景噪声。网站的学习中心部分提供了显示正确洗涤技术的视频,或单击此处。

    问:我可以冷冻和解冻我的样品多少次?

    A.建议的冷冻/解冻周期因套件而异。我们建议避免重复冷冻和解冻循环,除非手册中另有说明。如果采集的样本量允许,准备并冷冻等分试样,以消除或减少冷冻/解冻循环。

    问:我可以使用自己的“自制"缓冲器吗?

    A.每个试剂盒都含有稀释剂和缓冲液,其配方与特定的样品类型紧密匹配。如果使用未随试剂盒提供的组件进行检测,制造商将不保证试剂盒的性能。

    问:如果稀释剂用完了怎么办?

    A.提供足够的试剂,以在遵循方案时运行整个试剂盒。如果您的研究类型需要更高的稀释度,请在设置分析之前计算所需的稀释剂量,并且可以购买额外的稀释剂。请联系客户支持以获取有关单个组件可用性的信息。

    问:我的控制装置超出范围。我的数据是否无效?

    A.对照品的浓度必须在分析证书规定的范围内。如果对照超出范围,化验可能无效。此外,确保已使用协议中建议的曲线拟合。如果提供了多个建议,则使用适合标准数据点的回归方法。

    问:我的标准曲线没有得到很好的值。我可以使用协议中的示例值吗?

    答:没有。切勿使用示例值来计算化验结果。应根据每次测定获得的标准值/校准值生成样品浓度。

    问:我的样本产生的OD值超出标准范围。我还能计算浓度吗?

    A.只能使用标准曲线范围内的样本值。超出此范围的值通常不是线性的,可能导致错误的推断结果。

    问:我的标准曲线很好,但我的样本没有得到信号。为什么?

    A.样品可能含有分析物,但基于试剂盒的灵敏度,无法检测。样本的矩阵也可以掩盖检测。确保按照方案中的规定进行稀释,并审查程序,以确保所有试剂的添加量和顺序正确。

    问:我可以运行多少个样本?

    A.ALPCO现在提供了一个工具来帮助计算一个套件中可以运行的样本数量。一旦您审查了协议以确定您计划运行的特定试剂盒可能需要的标准品、控件和空白品的数量,请单击此处进入样本计算器。

    Q.什么是参考波长?

    A.参考波长是用于校正(标准化)主波长OD值的次级波长。这有助于解释钢板中的缺陷。

    问:为什么450nm是常用的测量波长?

    A.测量波长由每个试剂盒中使用的基质确定。最常见的是TMB。它产生一种在650nm波长下可测量的蓝色。它可以通过停止与1M磷酸或1M硫酸的反应而用于终点测定。酸化时形成黄色反应产物,其在450nm下可测量。

    Q.测量波长和参考波长之间的区别是什么?

    A.测量波长和参考波长之间的主要区别在于,第一个波长用于读取基板产生的吸光度,第二个波长(参考波长)用于检测板中的缺陷。

    问:我可以在没有参考波长的情况下读取该板吗?

    答:是的,你可以。然而,使用参考波长可以提高测定的灵敏度。

    ELISA故障排除指南

    查看完整的ELISA故障排除指南

    钢板清洗不足

    对于自动清洗机:检查喷嘴是否堵塞,验证分配量,并定期清洁以防止和清除任何堆积物。有关更多维护信息,请参阅用户手册。

    对于手动冲洗:确保所有井都用冲洗缓冲液强制过满。避免使用多通道移液管进行清洗。考虑从清洗瓶切换到手持式歧管或自动洗板机,特别是在进行化学发光分析时。这里提供了显示正确洗涤技术的视频。

    不要跳过清洗或浸泡步骤。

    添加缀合物或基质期间多通道移液管出现问题

    检查多通道移液管校准。确保所有端固定牢固,每次更换端时,吸取相同体积的液体。观察气泡并考虑反向吸移技术,以确保气泡不会干扰吸移精度。参见正向和反向移液视频。

    移液技术

    检查单吸管校准。观察气泡并考虑反向吸移技术,以确保气泡不会干扰吸移精度。参见正向和反向移液视频。

    井内气泡

    确保在每个清洗步骤后用力敲打板,使其干燥,以尽量减少孔中残留的清洗缓冲液。加入分析试剂(尤其是基质)后残留在孔中的气泡应在平板培养和平板读数之前去除。可以使用干净的移液管端来去除气泡。

    仅样本的重复之间精度差(高CV值)

    样品混合不足

    在移液之前对每个样品进行涡流,以确保样品均匀。

    移液技术

    在将第一个样本复制品转移到平板之前,将样本从端吸入和取出两次,以覆盖端内部。在转移样品时,确保没有样品液滴粘附在端的外部。如果容量允许,考虑采用反向吸移技术,以确保气泡不会干扰吸移精度。参见正向和反向移液视频。

    钢板清洗不足

    对于自动清洗机:检查喷嘴是否堵塞,验证分配量,并定期清洁以防止和清除任何堆积物。有关更多维护信息,请参阅用户手册。

    对于手动冲洗:确保所有井都用冲洗缓冲液强制过满。避免使用多通道移液管进行清洗。考虑从清洗瓶切换到手持式歧管或自动洗板机,特别是在进行化学发光分析时。这里提供了显示正确洗涤技术的视频。

    不要跳过清洗或浸泡步骤。

    高样本和低样本的结转

    确保每个样本之间的端都发生了变化。每次孵育时使用新的平板密封剂。

    样品稀释缓冲液错误

    如果样品需要稀释,确认使用了适当的稀释缓冲液。

    标准曲线不佳(与之前的结果或分析证书不匹配)

    钢板清洗不足

    对于自动清洗机:检查喷嘴是否堵塞,验证分配量,并定期清洁以防止和清除任何堆积物。有关更多维护信息,请参阅用户手册。

    对于手动冲洗:确保所有井都用冲洗缓冲液强制过满。避免使用多通道移液管进行清洗。考虑从清洗瓶切换到手持式歧管或自动洗板机,特别是在进行化学发光分析时。这里提供了显示正确洗涤技术的视频。

    不要跳过清洗或浸泡步骤。

    移液技术

    检查移液管校准。观察气泡并考虑反向吸移技术,以确保气泡不会干扰吸移精度。参见正向和反向移液视频。

    试剂混合不充分

    使用前,让重组试剂放置在手册中所示的时间长度内。使用适当的设备(涡流混合器等)确保试剂在使用前是均匀的。如果混合试剂盒试剂以形成“工作"成分,则确认使用了正确的体积和稀释剂。

    板材晃动不足

    不正确的摇动运动会导致混合不足和抗体/分析物相互作用。按照使用说明中建议的速度摇动板。建议使用半径很小的轨道运动振动器。参见示例。

    添加到井中的试剂量错误

    检查剩余体积,以确认向孔中添加了正确体积的试剂。

    制备试剂的储存

    确保所有试剂正确储存并在规定期限内使用。对于化学发光测定,预先制备鲁米诺底物可导致信号降低。

    环境温度低或不一致

    遵循方案中所示的培养温度。

    化学发光仪器的差异

    信号,或相对光单位(RLU),可以在不同的化学发光板读数器之间显著变化。典型"标准曲线或分析证书中显示的信号可能与观察到的信号非常不同。

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