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    alpco试剂问题与解答

    发布时间: 2023-02-15  点击次数: 281次

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    alpco问题与解答

    所有孔变为亮蓝色用于比色测定

    钢板清洗不足

    对于自动清洗机:检查喷嘴是否堵塞,验证分配量,并定期清洁以防止和清除任何堆积物。有关更多维护信息,请参阅用户手册。

    对于手动冲洗:确保所有井都用冲洗缓冲液强制过满。避免使用多通道移液管进行清洗。考虑从清洗瓶切换到手持式歧管或自动洗板机,特别是在进行化学发光分析时。这里提供了显示正确洗涤技术的视频。

    不要跳过清洗或浸泡步骤。如果不在SA-HRP和底物步骤之间清洗,将导致所有井显示非常高的信号。

    酶缀合物污染底物

    确保所有容器清洁且标记清晰。检查TMB是否为蓝色。如果TMB变为蓝色,请不要在化验中使用,并联系产品支持人员。使用前不要将基材暴露在阳光下。使用新的试剂容器添加每个组分。

    高背景(空白或0标准值过高)

    钢板清洗不足

    对于自动清洗机:检查喷嘴是否堵塞,验证分配量,并定期清洁以防止和清除任何堆积物。有关更多维护信息,请参阅用户手册。

    对于手动冲洗:确保所有井都用冲洗缓冲液强制过满。避免使用多通道移液管进行清洗。考虑从清洗瓶切换到手持式歧管或自动洗板机,特别是在进行化学发光分析时。这里提供了显示正确洗涤技术的视频。

    不要跳过清洗或浸泡步骤。

    旧的或受污染的洗涤缓冲液

    清洗缓冲液存放时间过长或留在自动清洗管中会导致污染。根据需要准备新鲜的洗涤缓冲液,并定期清洁自动洗涤设备。

    酶缀合物污染底物

    确保所有容器清洁且标记清晰。检查TMB是否为蓝色。如果TMB变为蓝色,请不要在化验中使用,并联系产品支持人员。使用前不要将基材暴露在阳光下。使用新的试剂容器添加每个组分。

    错误的共轭稀释

    高于正常浓度可能导致背景升高。检查残余体积并确认缀合物制备正确。

    读板器中使用了错误的过滤器

    确认在读取铭牌时使用了协议中指示的正确过滤器。包括使用说明中所示的建议减去空白或OD读数。

    标准品和样品无显色或OD读数非常低

    读板器中使用了错误的过滤器

    确认在读取铭牌时使用了协议中指示的正确过滤器。

    试剂配制错误

    确保所有容器都有清晰的标记,并将适当的浓缩液和稀释剂添加到正确的小瓶中,以使每个“工作"成分用于分析。

    试剂混合不充分

    使用前,让重组试剂放置在手册中所示的时间长度内。使用适当的设备(涡流混合器等)确保试剂在使用前是均匀的。

    板材晃动不足

    不正确的摇动运动会导致混合不足和抗体/分析物相互作用。按照使用说明中建议的速度摇动板。建议使用半径很小的轨道运动振动器。参见示例。

    试剂中的混合

    如果一次运行多个分析,请将试剂分开以避免混淆。在向分析板添加试剂之前,仔细检查试剂标签。

    试剂被污染或添加顺序错误

    验证所有化验成分的外观、储存条件和有效期。按照协议中的步骤进行操作。确保按正确顺序添加每个组件。

    使用了备用部件批次或过期部件

    某些组件具有高度的批次特异性。务必与制造商核实是否使用了备用部件批次。不要使用过期的试剂。

    未正确遵循分析培养时间

    遵循方案中所示的培养时间和温度。降低任一因素都会影响测定动力学,并可能导致低信号。如果方案列出了TMB培养的时间范围,则确保在建议的最长时间内培养试验。

    延迟读取板材

    如果进行化学发光ELISA,则应在短时间内读取平板。有关套件特定时间,请参阅协议。延迟读取印版会导致信号降低。

    仅样品无显色或OD读数非常低

    实验设计中的错误

    调查样品来源。如果可能,使用替代方法测试样品,以确认样品在工作测定范围内对感兴趣的生物标志物应为阳性。当刺激生物标志物生产时,可能需要调整实验设计。

    样品处理不正确

    确保样品未在室温或冷藏条件下长时间暴露。验证样品未经历重复的冻融循环。如果可能,在≤-70°C的温度下等分并储存样品。

    样本稀释计算错误

    验证样品稀释度是否正确。如有必要且在试剂盒规格范围内,以较高浓度(较低稀释度)重新测试样品。

    未验证的样本类型

    未经验证的样品类型可能与试剂盒的测定缓冲液或测定范围不兼容。

    板材晃动不足

    不正确的摇动运动会导致混合不足和抗体/分析物相互作用。按照使用说明中建议的速度摇动板。建议使用半径很小的轨道运动振动器。参见示例。

    控制超出范围

    试剂处理不正确

    确保试剂已正确储存和处理,且在有效期内。注意,一些试剂在重构后的保质期有限。

    标准曲线差

    验证是否使用了适当的标准曲线,并对照先前分析的值和分析证书中给出的值检查结果。有关更多信息,请参阅“较差标准曲线"部分。注:对于化学发光测定,不同的化学发光读数器的RLU可能会有很大差异。

    标准品和/或对照品重构错误

    有关标准品/校准品和对照品重构的正确体积和缓冲液,请参见方案和批次特定分析证书。使用前,让重组试剂放置在手册中所示的时间长度内。使用适当的设备(涡流混合器等)确保试剂在使用前是均匀的。

    使用了错误的曲线拟合

    使用方案中建议的曲线拟合。如果提供了多个建议,请使用适合标准数据点的回归方法。强烈建议使用带有4参数和5参数回归选项的软件程序。

    样本的意外结果

    样品制备不当

    按照方案中的方法进行适当的样品制备。确保样品未在室温或冷藏条件下长时间暴露。验证样品未经历重复的冻融循环。如果可能,在≤-70°C的温度下等分并储存样品。

    样本ID混淆

    检查样本ID,以确认其已正确标记并添加到平板上。

    样品稀释误差

    如有必要,验证样品稀释度是否正确,外推的样品值是否与正确的稀释系数相乘。

    报告单位的差异

    验证报告的计量单位与分析的计量单位一致。执行任何必要的换算计算。当比较不同试剂盒中获得的值时,如果有参考标准,确保校正化验校准中的任何差异。

    实验设计中的错误

    调查样品来源。如果可能,使用替代方法测试样本,以确认预期样本值。当刺激生物标志物生产时,可能需要调整实验设计。

    干扰物质

    考虑与样本基质(如使用抗凝剂)、临床诊断(如类风湿因子)或治疗相关的潜在干扰物质。

    特异性

    由于糖基化、蛋白质折叠和抗体特异性的差异,不同系统(大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞系)中表达的天然蛋白质和重组蛋白质的识别可能有所不同。不同供应商的套件可能会有不同的认可度。

    含量漂移:从板开始到结束的值差异

    因重组或稀释导致的延迟

    在开始化验工作流程之前,准备好标准品、对照品和稀释样品。

    试剂不在温度下

    在开始化验前,确保所有所需试剂处于使用说明书中规定的室温。

    向第一口井和最后一口井添加试剂之间的延长时间

    如果可能,在稀释板或微量滴定管中制备标准品和对照品,然后使用多通道移液管转移至测定板。使用试剂容器和多通道移液管将常用试剂添加到测定板中。

    批间变异性(对照品或在不同平板上测试的样品的精度差)

    操作员间可变性

    观察试剂制备、移液技术和测定时间的差异。

    移液管校准的差异

    移液管校准的差异可能会导致可变性,特别是在移液量较小时。

    仪器仪表的差异

    当在同一天或不同的日子在多个平板上测试样品或对照品时,应在相同的设置下使用相同的平板振动器、平板清洗器和平板读取器。

    环境条件的变化

    注意温度的差异。请记住,一般室温、靠近窗户(尤其是在非常寒冷或非常晴朗的日子)以及靠近可能会散发热量的仪器可能会影响化验温度。

    样品处理的差异

    额外的冻融循环或在室温或冰箱中增加的时间可能会影响样品结果。

     

     

     

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