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    minerva-biolabs常见问题

    发布时间: 2022-12-07  点击次数: 331次

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     Minerva-biolabs常见问题

    蛋白酶K

    提供多少毫克蛋白酶?

    每小瓶蛋白酶K(目录号56-0002)含有11 mg酶,约为30U/mg,再悬浮在550µl所含的再水合缓冲液中后,其浓度为20 mg/ml

    你推荐什么样的培养条件?DNA提取试剂(Venor®GeM样品制备试剂盒)建议添加蛋白酶K,然后继续提取(10分钟,70°C温育)。这难道不会给酶足够的时间来工作并可能降解它吗?

    在我们(广泛)测试的方案中,蛋白酶K的孵育与样品裂解同时进行(您提到的步骤是在70°C10分钟)。其想法是将裂解和蛋白酶K处理结合在一个步骤中,从而使方案尽可能短而有效。我们的数据(和质量控制)表明,这种处理对相对复杂的基质非常有效,表明在短的培养时间(和酶过量!)下可以忽略变性。例如,对于更复杂的基质如组织,我们建议分离提取/裂解步骤和蛋白酶K处理,并在酶的最佳温度50-56°C下进行蛋白酶K处理。。

    我在用Venor®GeM样品制备试剂盒分离支原体DNA时遇到问题。由于样品的特殊性质,有时会出现柱堵塞的问题。有时样品中出现白色薄片(可能是有机来源),离心后留在上清液中,从而堵塞柱。

    有时在含有较高蛋白质量(例如疫苗、高血清浓度等)的样品中观察到柱堵塞。即使蛋白质可能不是主要成分,它们也可能参与蛋白质和其他成分之间复合物的形成。我们建议根据Venor®GeM样品制备试剂盒手册的说明尝试蛋白酶K处理(70°C培养步骤之前的可选步骤)。

    Venor®GeM样品制备套件

    我在用Venor®GeM样品制备试剂盒分离支原体DNA时遇到问题。由于样品的特殊性质,有时会出现柱堵塞的问题。有时样品中出现白色薄片(可能是有机来源),离心后留在上清液中,从而堵塞柱。

    有时在含有较高蛋白质量(例如疫苗、高血清浓度等)的样品中观察到柱堵塞。即使蛋白质可能不是主要成分,它们也可能参与蛋白质和其他成分之间复合物的形成。我们建议根据Venor®GeM样品制备试剂盒手册的说明尝试蛋白酶K处理(70°C培养步骤之前的可选步骤)。

    我们将对EP合规性进行支原体检测。因此,我们计划使用Venor®GeM样品制备试剂盒从细胞上清液中提取支原体DNA。然而,我们需要将一些上清液冷冻在-20ºC。你建议什么:从所有样本中提取DNA并冷冻它们,或者在95ºC下处理上清液(稳定步骤)并冷冻它们?我们能把它们冷冻多久?

    我们强烈建议在取样后直接加热灭活样品。如果你选择冷冻,DNase在解冻阶段会活跃,降解低拷贝数的支原体DNA。热灭活后,您可以保存样本,甚至可以在2-8°C的温度下保存一周,并在室温下无限制地处理它们。两种版本都同样有用:热灭活或DNA提取,都是在采样后立即进行。

    对于这两个版本,您可以将样品储存在<-18°C的温度下至少1年。

    Venor®GeM产品线(用于常规PCR

    适用于所有Venor®GeM支原体检测试剂盒

    该试剂盒可检测到多少种支原体?

    基于引物基因组序列比对,我们的试剂盒可以检测到至少110种属于软体动物纲的物种(瘦子、支原体、螺旋体、支原体),其中约165种是文献中提到的物种。然而,对于许多不太常见的物种,没有可靠的数据或序列信息。因此,我们不能对这些物种的试剂盒特异性做出任何声明。

    重要的是,我们可以检测出版物中提到的所有物种作为重要的细胞培养污染物和许多其他污染物。

    适用于所有Venor®GeM支原体检测试剂盒

    内部控制DNA(或内部扩增控制)的功能是什么?

    内部控制表示在同一PCR反应管中与靶扩增(支原体)平行发生的第二扩增反应。内部控制扩增子的出现表明条件是PCR允许的(没有PCR抑制)。因此,内部控制DNA是一种有用的验证工具,有助于排除假阴性。

    Venor®GeM试剂盒中,内部控制与目标扩增反应的竞争较弱。结果,目标DNA的强扩增(例如强污染)可能导致内部控制扩增失败。因此,在严重污染的样本或非常有效的PCR扩增的情况下,缺失内部控制是全正常的情况。因此,内部控制的结果与阳性PCR反应无关。

    适用于所有Venor®GeM支原体检测试剂盒

    我想在95°C下冷冻灭活步骤后的上清液,稍后再使用。在什么温度下,我可以保存这些样品多长时间?

    根据我们的经验,样品可以在-20°C下安全储存至少1年。还可以将灭活上清液在RT下储存5天或在+2-+8°C下储存14天。

    适用于所有Venor®GeM支原体检测试剂盒

    我们使用Venor®GeM qEP进行的检测一直效果良好。然而,这次阳性对照失败了。补液后,试剂盒按照方案中的建议正确储存。可能出了什么问题?您有哪些建议可以确保阳性对照的良好表现?

    阳性对照作为一个小瓶提供。再水合后,只要您使用无DNase移液管端并在清洁的工作区域工作,该试剂在频繁的解冻/冷冻循环中是稳定的。

    然而,等分补充水分的阳性对照可能会有所帮助。

    我们建议将其等分到PCR管中,因为它们通常是干净的、无DNase的和低结合性的。

    适用于所有Venor®GeM支原体检测试剂盒

    在使用Venor®GeM支原体检测试剂盒检测支原体之前,请告诉我在没有抗生素的情况下培养细胞48小时是否足够?

    如果您的抗生素没有显示出对支原体的活性,则可以在没有任何事先无抗生素培养的情况下进行测试,并将提供有关支原体污染的可靠信息。

    在支原体活性抗生素的情况下,我们知道,在无抗生素培养的5天内,大多数支原体种类的微小数量将增长到易于检测的水平。快速生长的支原体种类可能在48小时后可被检测到。总之,在没有此类抗生素的情况下,等待5天培养物生长将给您带来可靠的结果。请记住,PCR是最敏感的方法。使用其他技术,您可能需要培养和延迟测试更长时间。

    适用于所有Venor®GeM支原体检测试剂盒

    Venor®GeM Classic手册指出,在培养物中使用霉素和/或霉素不会影响测试。然而,我们使用的是抗生素抗真菌溶液,除了霉素和霉素外,还含有性霉素B。在进行支原体测试之前,我们是否应该在没有抗生素抗真菌的情况下培养细胞?

    性霉素B对支原体没有活性,不应影响支原体检测。

    补充抗生素抗真菌溶液的培养物可直接使用Venor®GeM Classic试剂盒进行测试。

    适用于所有Venor®GeM支原体检测试剂盒

    我们在媒体上使用了大霉素,我想知道这是否会干扰测试。你指出霉素和霉素不会显著改变测试的敏感性。大霉素会干扰吗?

    尽管PCR检测本身不会受到大霉素的影响,但支原体在样本中生长的能力显然会受到影响。大霉素对支原体有活性,不幸的是导致耐药菌株的发展很快。因此,如果可能,我们通常建议在培养1周后,在没有抗生素添加剂的情况下测试培养物。

    适用于所有Venor®GeM支原体检测试剂盒

    我们希望在解冻后直接用Venor®GeM Advance测试细胞(在液氮中冷冻保存),而无需事先培养。这可能吗?

    用我们的PCR检测方法(任何试剂盒)直接检测解冻样品或冷冻样品通常是不可能的。原因是冷冻介质中通常含有高浓度的FBSDMSO。这两种物质都抑制PCR反应。对于这样的样品,PCRDNA提取是必要的。

    仅适用于Venor®GeM Classic

    我根据方案进行的PCR没有检测到任何条带(既没有阳性对照,也没有内部DNA对照)。

    试剂都是新鲜重悬的,没有反复冷冻和解冻。我使用了热启动Taq聚合酶,它在其他PCR反应中表现良好。

    出了什么问题?

    对于Venor®GeM Classic,我们建议使用热启动DNA Taq聚合酶。

    使用在其他PCR设置中表现良好的聚合酶并不一定保证该特定PCR分析的成功。

    套件中提供的缓冲液对于底漆的正常工作至关重要。

    并非所有聚合酶在试剂盒缓冲液和条件下都表现良好。

    没有扩增通常表明酶与试剂盒不兼容。

    仅适用于Venor®GeM ClassicOneStepAdvance

    一些样本显示出感兴趣基因(支原体)的强条带,而内部对照没有条带。我的样本是否被污染或PCR运行无效?

    只有阴性样本才需要出现内部控制带。当你的样本被支原体严重污染时,它的DNA会被成比例地扩增。在这些条件下,由于试剂竞争,内部控制带逐渐消失。因此,您可以得出结论,您的PCR运行是有效的,不幸的是,您的样本受到严重污染。

    仅适用于Venor®GeM ClassicOneStepAdvance

    如产品手册所示,我们使用Venor®GeM ClassicMinerva BiolabsTaq聚合酶。我们无法检测到阳性或阴性控制通道中的任何频带(内部控制未被放大)。原因可能是什么?

    -PCR反应失败的可能原因中,我们建议考虑使用中的PCR循环仪可能存在技术问题的可能性。这不是一个遥远的可能性。为了评估循环仪的性能,我们建议测试具有相同PCR设置的另一个循环仪或具有相同循环仪的另一PCR设置。

    -阳性对照DNA的再水合不正确(例如体积)

    -PC被正确地再水合,但进行了太多的冷冻/解冻循环,或由于DNase污染而发生DNA降解。

    北京华新康信也有Minerva-biolabs实验试剂销售,下面给大家讲讲Minerva-biolabs服务以及实验样本;Moltox ForteBio Moltox ForteBio Moltox ForteBio Moltox ForteBio Moltox ForteBio  Toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin toxin  Minerva-biolabs实验  Minerva-biolabs试剂 Minerva-biolabs说明  Minerva-biolabs试剂方案Minerva-biolabs实验说明  Minerva-biolabs说明书 Minerva-biolabs技术参数 Minerva-biolabs方案对比  Minerva-biolabs介绍  Minerva-biolabs广州试剂 Minerva-biolabs深圳试剂Minerva-biolabs说明书 Minerva-biolabs技术参数Minerva-biolabs实验方案Minerva-biolabs技术对比Minerva-biolabs购买说明 Minerva-biolabs天津试剂 Minerva-biolabs北京试剂Minerva-biolabs厦门试剂Minerva-biolabs大理试剂Minerva-biolabs武汉试剂Minerva-biolabs福建试剂Minerva-biolabs安徽试剂Minerva-biolabs广西试剂Minerva-biolabs厦门试剂Minerva-biolabs常州试剂Minerva-biolabs安徽试剂Minerva-biolabs长沙试剂Minerva-biolabs哈尔滨试剂Minerva-biolabs沈阳试剂Minerva-biolabs深圳试剂Minerva-biolabs武昌试剂Minerva-biolabs湖北试剂Minerva-biolabs湖南试剂Minerva-biolabs上海试剂Minerva-biolabs ForteBio实验试剂,moltox实验试剂,toxin实验试剂,ForteBio  moltox  toxin 各种试剂的实验参数,说明书,欢迎咨询  Minerva-biolabs试剂介绍  Minerva-biolabs试剂介绍  Minerva-biolabs研究方案

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