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什么是ATCC细胞？如何使用它？

发布时间： 2022-10-22　　点击次数： 2083次

　　ATCC细胞的原理在不加任何条件下直接冻存细胞时，细胞内和外环境中的水都会形成冰晶，能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等，能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂，可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在－130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。

　　细胞复苏时速度要快，使之迅速通过细胞最易受损的－5～0℃，细胞仍能生长，活力受损不大。目前常用的保护剂为二甲亚砜（DMSO）和甘油，它们对细胞无毒性，分子量小，溶解度大，易穿透细胞。

　　ATCC细胞的使用方法：
　　1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
　　取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置4-6小时或隔夜，以稳定细胞状态。然后，用75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，收集瓶内液体于50ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，用6ml*培养基重悬，全部接种到25cm2培养瓶中，再放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。如果离心后细胞量很多，可以直接1:2分瓶培养。
　　2、细胞传代：细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离5min，弃上清，用12ml*培养基重悬细胞，按1:2的比例进行接种传代，接种到25cm2培养瓶中，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养，2-3天更换培养液。换液的步骤同细胞NK-92细胞，ATCC细胞，培养技术传代步骤。
　　3、细胞冻存：
　　a、细胞生长至覆盖培养瓶的85%及以上面积时，收集瓶内液体于15ml离心管中，1000rpm离心5min，弃上清，用适当量的冻存液（基础培养基：FBS：DMSO=5:4:1）重悬细胞，并放置于冻存管中。
　　b、先将细胞冻存管放置于4℃0.5h，再放置于-20℃1.5h，然后将其移入-80℃隔夜，24h后可转入液氮中进行长期保存。
　　4、细胞复苏：
　　a、从液氮中取出细胞冻存管，快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
　　b、将冻存管中的细胞移至含有5ml*培养液的15ml离心管中，然后1000rpm/min，离心5min。
　　c、弃上清，沉淀细胞用6ml*培养基重悬，接种到培养瓶中，zui后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养。
　　d、第二天，换用新鲜*培养基继续培养。

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