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    Abwayss常见问题

    发布时间: 2021-06-22  点击次数: 421次

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    β肌动蛋白抗体

    货号: AB0035规格 : 50μl, 100μl

    摩尔重量: 42kDaUniProt : P60709

    同种型:兔 IgG克隆性:单克隆

    可用性 :次日发货

    产品数据表

    β肌动蛋白抗体

    货号:AB0035 反应性:人鼠鼠

    同种型:兔 IgG 应用:WB IHC ICC/IF

    UniProt IDP60709

    所有名称:ACTIN;行动管制局; β-肌动蛋白; β 肌动蛋白;肌动蛋白β;

    形式:液体

    储存说明:在 +4°C 下短期储存。长期储存在-20°C。避免冷冻/解冻循环。

    储存缓冲液:pH 7.4150mM NaCl、和 50% 甘油。

    纯度:亲和色谱

    免疫原:合成肽

    分子量:42 kDa

    白平衡 1:3000~1:10000

    IHC 1:50~1:200

    ICC/IF 1:50~1:200

    β-肌动蛋白是已鉴定的六种不同的肌动蛋白亚型之一。在细胞中发现的肌动蛋白分子

    各种物种和组织的免疫学和物理特性往往非常相似。所以,

    针对 β-肌动蛋白的抗体可用作蛋白质印迹的加载对照。不过需要注意的是

    β-肌动蛋白的水平在某些细胞中可能不稳定。例如,β-肌动蛋白在脂肪中的表达

    组织非常低,因此不应用作这些组织的加载控制。

     

    Abwayss常见问题

    问:我应该如何储存我的抗体管?温度对稳定性的影响有多大?

     

    A:请将抗体保存在-20°C 的原始试管中,不要等分。避免反复冻结!

     

    问:我应该如何储存细胞裂解物?

     

     A:细胞裂解液可在-20°C 下短期使用,但应在-80°C 下长期保存。活化蛋白质样品的降解变化很大,这取决于蛋白质的性质和样品中活化蛋白质的含量。

     

    问:我可以将该抗体在室温下孵育 1 小时而不是在 4°C 下孵育过夜吗?

     

     答:我们的活化特异性抗体经过纯化,可仅区分一或两个翻译后修饰的氨基酸残基。这些修饰包括磷酸化、乙酰化和酶切。与识别完整蛋白质的抗体相比,针对此类修饰位点产生的大多数抗体具有较低的亲和力。因此,通过在 4°C 下孵育过夜来延长抗体和抗原相互作用时间以获得最佳信噪比至关重要。

     

    问:如果一个物种没有在数据表上列为与抗体交叉反应,这是否意味着该物种没有经过测试?

     

    答:如果我们在一个物种中没有获得阳性结果,我们不会列出该物种。我们测试的细胞系可能含有低水平的特定蛋白质,或者我们使用的诱导在该特定细胞系中不起作用。因此,我们强烈建议您比较正在研究的物种和我们的抗体针对的物种之间修饰位点周围的肽序列(每侧 5 个氨基酸)。在大多数情况下,我们的抗体是针对人类蛋白质序列产生的,并使用亲和层析进行高度纯化。很多时候,如果序列相同或在修饰位点以外的残基上只有 1 2 个氨基酸差异,则抗体很有可能识别您的蛋白质。

     

    问:为什么我不能对你们的抗体使用我自己实验室的蛋白质印迹实验方案?

    答:我们的抗体经过优化,可使用我们的标准蛋白质印迹实验方案以最少的背景提供*的信号。与您自己的程序相比,使用我们的协议,您将节省时间和材料。

     

    问:为什么这种抗体不能通过蛋白质印迹起作用?

     

     答:我们的蛋白质印迹程序有几个细节对于避免信号丢失和/或高背景至关重要。不要过度清洗膜。应使用 TBS/0.1% Tween-20 清洗 3 次,每次 10 分钟。过度洗涤会洗掉一抗。推荐的洗涤条件经过优化以产生最佳的信噪比,从而获得*、最干净的结果。不要过度阻塞(例如,超过一小时或过夜)。过度封闭会降低某些抗体的特异性信号。请务必查阅各个产品的数据表,了解每种抗体的推荐封闭时间。您正在测试的物种是否列在抗体数据表的交叉反应部分中?您是否加载了至少 20 µg 的总细胞裂解液?您是否诱导了细胞裂解物样品中蛋白质的活化?

     

    问:我如何才能确保可重复的西方结果?

     

     A : 关于为什么蛋白质印迹结果似乎难以重复,有几种可能性。要找出这种情况的原因,请考虑以下事项: 您是如何储存抗体的?抗体在稀释缓冲液中稀释后不能重复使用。许多抗体的工作浓度非常低,每次连续印迹时浓度可能会降低。您确定您的样品中含有活化蛋白吗?用于活化蛋白质的细胞裂解物样品制备可能因细胞数量、药物诱导时间、细胞传代次数和储存条件而异。我们的产品有望在保质期内以最佳水平运行。

     

    问:如何使用固定化抗体进行 IP

     

     答:为了获得最佳结果,获得均匀的珠浆很重要。以下步骤将确保这种均匀性:将含有珠浆的管子放在冰桶中 10 分钟。将管子倒转几次,以获得 50% 的珠到缓冲液浆液。如有必要,轻轻涡旋管。为了准确地吸取产品,切掉移液器吸头的末端并将吸头插入珠浆中,刚好足以吸取固定的抗体珠混合物。将固定化抗体与 200 µg 总细胞裂解物(约 1 mg/ml)以及推荐的抗体稀释度在 4°C 下孵育过夜。

     

    问:该抗体对 IHC 有效吗?

     

     答:我们会定期测试用于福尔马林固定石蜡包埋样品的抗体。IHC-P 推荐通过严格验证标准的那些。我们还在新鲜冷冻组织样本上测试产品,推荐成功染色的产品用于 IHC-F。那些没有将 IHC-P IHC-F 列为推荐应用的产品可能已经失败,可能没有经过测试,或者可能需要我们无法获得的特定组织样本。建议您  就您感兴趣的产品缺乏 IHC 建议的性质与我们联系,因为可能有数据表明它可以在另一个系统中运行良好。或者,我们可能有数据表明另一种产品将是组织染色的更好选择。

     

    问:这种抗体对 IF 有效吗?

     

     答:我们在大多数情况下通过免疫细胞化学测试了所有抗体,在某些情况下通过免疫荧光测试了所有抗体。最终结果显示在数据表和网站上,或通过网站联系我们以 获取更多详细信息。

     

    问:你们如何保证抗体的质量?

     

     答:Abwayss 努力在主要应用中测试我们所有的产品,例如蛋白质印迹、免疫细胞化学、免疫组织化学、FACS IP。我们定期在不同的细胞或组织样本(包括人类、小鼠和大鼠)上测试我们的抗体。我们产品的高质量是 Abwayss 最重要的考虑因素。我们不断针对新应用测试我们的产品,如果您对数据表中未列出的特定应用感兴趣,请通过网站联系我们的技术支持以获取最新应用更新或帮助解决您的任何问题。

     

    问:您如何控制不同批次的质量?

     

    答:Abways努力实现产品的一致性或逐批改进。作为标准,我们在我们推荐的所有应用中测试新批次与旧批次。每个应用的推荐稀释度都按照我们的协议针对每个批次进行了优化。有时会调整大量抗体之间的浓度以获得更好的结果。

     

     polyplus 代理   114-15 polyplus
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    代理  na12878 coriell
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