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    anatrace技术公告100如何纯化膜蛋白膜

    发布时间: 2020-03-12  点击次数: 140次

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    试剂盒包含以下每种物质1克:CYMAL-1、2、3和4。

     

    技术公告100如何纯化膜蛋白膜

    蛋白的研究在过去几年中取得了显著的进展。 这在一定程度上要归功于用于操纵这类蛋白质的工具和试剂的进步。 洗涤剂在膜蛋白的提取、纯化和操作中起着重要作用,它们的两亲性使它们能够与疏水性膜蛋白相互作用,使它们在自然的双分子层环境之外保持水溶性。 不幸的是,溶解性并不总是转化为天然结构和稳定性; 用于萃取的洗涤剂可能与净化和 / 或生化研究不兼容。 此外,适用于一种膜蛋白的洗涤剂可能不适用于另一种膜蛋白。 虽然没有一套关于清洁剂用于膜蛋白的“黄金法则” ,但是了解如何净化膜蛋白在开始你的研究工作时是很有用的。 1. 从类似的来源和类似的薄膜中寻找其他的净化物。 不同的组织、生物和膜类型有时需要不同的清洁剂和条件; 例如,细菌来源可能需要哺乳动物来源的不同溶解程序。

    完全分散和脂质过滤是色谱分离成功的关键。 如果蛋白质不能从其他蛋白质中分离出来,并且大量附着的磷脂被去除,那么蛋白质就不能根据自身的特性进行结合和色谱分析。 相反,它会在附着的其他蛋白质和脂质的基础上表现异质性。3。 一种有利于增溶完整膜和去除多余脂质的清洁剂可能不是继续纯化“裸蛋白”的zui佳选择(可能太粗糙)。 因此,在最初的步骤中,你可能想要选择一种相对便宜、相对纯净的洗涤剂,这种洗涤剂可以很容易地换成另一种。 例如,胆酸盐和类固醇清洁剂都是强烈的,带电的或两性离子的,类固醇清洁剂可以很好地破坏薄膜,有助于去除色谱步骤中多余的脂质,例如羟基磷灰石。 他们也有一个高临界胶束,这意味着他们可以很容易地通过透析或交换另一个柱。

    色谱纯化需要一种良好的分散清洁剂,既能稳定蛋白质,又不会使酶失活。 对许多人来说,triton x-100是非常适合的,但是污染物和280纳米吸光度的问题。 十二个碳链长度的碳氢化合物尾巴通常是必要的良好的稳定和分散,特别是较大的多亚基酶。 十二烷基麦芽糖苷的效果通常和海卫一一样好,甚至更好,没有任何缺点。 短链洗涤剂和一些带电洗涤剂会分离多亚基蛋白质。 在这个阶段,反复试验是非常重要的,要注意保持足够高的洗涤剂与蛋白质的比例,以确保蛋白质能够很好地分散(洗涤剂的浓度将远远高于 cmc)。 即使一种蛋白质在某种特定的洗涤剂中不活跃,如果你能证明这种活跃是可逆的,通过添加脂质或其他洗涤剂,你仍然可以使用它。

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