polyplus宝利嘉是阳离子化的大分子多聚乙烯亚胺(PEI)及其衍生物,其与外源基因结合形成颗粒状,与细胞表面的蛋白多糖结合,通过细胞"内吞作用"进入细胞。PEI-复合体具有质子海绵的特性,能吸收溶酶体的H+,在复合体中形成酸性环境使核酸酶失活,保护DNA免受核酸酶的降解。进入细胞后,JetPEI复合体囊泡肿胀破裂,将DNA释放到细胞质中。
polyplus宝利嘉的基本步骤:
1、JetPEI溶液2μl和质粒DNA1μg混合5-30分钟。
2、将JetPEI-DNA复合体溶液加入到细胞液中(可以在含血清的培养基中)。
3、检测:N/P比率(影响转染效率的关键)
N/P比率是对JetPEI复合体的所带电荷的度量。它指的是DNA分子带负电的磷酸基团与JetPEI中N残基的摩尔比,是衡量核酸与转染试剂比例的参数。从理论上讲,JetPEI/DNA复合体的电中性为N/P=2-3,但实际操作时,N/P=5-10效果较好。
1、JetPEI转染试剂:JetPEI是PolyPlus-transfection的主导产品,毒性低,对细胞不会造成伤害。它能把基因转入各种粘附或悬浮的细胞系中以及原代细胞。
2、Invivo-JetPEI转染试剂:通过静脉、大脑、腹膜以及气管等体内途径进行转染,目前已在小鼠、大鼠、鸭、豚鼠和猴等动物身上取得成功。
3、TaggedJetPEIs:细胞介导的转染试剂
TaggedJetPEIs是偶联有配体的PEI衍生物,可将基因转入特殊的细胞。
A、JetPEI-Gal&invivo-JetPEI-Gal(肝细胞介导)
PEI衍生物,偶联有半乳糖。受体细胞:细胞表面表达半乳糖特异性膜血凝素的细胞,如肝细胞。
B、JetPEI-Man&invivo-JetPEI-Man(树突状细胞和巨噬细胞)
PEI衍生物,偶联有甘露糖。受体细胞:细胞表面表达甘露糖特异性受体的细胞,如巨噬细胞和树突状细胞。
C、JetPEI-RGD(上皮细胞和内皮细胞)
PEI衍生物,偶联有RGD肽链。受体细胞:细胞表面表达整合素的细胞,如上皮细胞和内皮细胞。
4、FluoJetPEI:荧光转染试剂
A、JetPEI-FluoF:PEI衍生物,偶联荧光素FluoF,通常用于胞内定位研究,适于荧光显微镜和流式细胞仪的检测。
B、JetPEI-FluoR:PEI衍生物,偶联四甲基罗丹明FluoR,常用于双色标记和协同定位的实验中,如用于绿色荧光蛋白或FITC标记的质粒的转染。
C、Invivo-JetPEI-FluoF&Invivo-JetPEI-FluoR:PolyPlus-transfection也提供体内转染的荧光试剂,常用于生物分布研究。
5、JetPEI-Biotin和invivo-JetPEI-Biotin:PEI衍生物,偶联Biotin,通过链亲和素检测JetPEI/DNA在细胞内的定位和分布。