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    cytoskeleton-乙酰赖氨酸工具 介绍

    发布时间: 2024-05-17  点击次数: 98次

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    乙酰赖氨酸工具

    概述

    翻译后乙酰化发生在赖氨酸残基的ε-氨基上,作为一种可逆且高度动态的PTM,已知其是多种细胞事件的关键调节因子,包括染色质结构、转录、代谢、信号转导和细胞骨架调节。

    主要功能

    首乙酰赖氨酸研究者的优化试剂盒

    分析细胞或组织样品中内源性或转染蛋白的乙酰化

    最完整的乙酰化蛋白质图谱

    化学计量分析带来更深入的机理见解

    查看备受关注的Signal™Seeker工具箱的新增内容(如下)

    新格式-信号导引头乙酰赖氨酸检测试剂盒(目录号BK163-S.15测定)

    新格式-信号导引头乙酰赖氨酸检测试剂盒(目录号BK16330个测定)

    -信号导引头乙酰赖氨酸检测试剂盒-AAC03(目录号BK16430个测定)

    新格式-乙酰赖氨酸亲和珠(AAC04

    乙酰赖氨酸抗体小鼠单克隆抗体

    乙酰赖氨酸小鼠单克隆抗体

    抗乙酰赖氨酸抗体是一种泛乙酰赖氨酸酯小鼠单克隆抗体,是Signal Seeker™产品线的一部分。抗乙酰赖氨酸抗体识别通过赖氨酸残基的ε-胺基团上的乙酰化进行翻译后修饰的蛋白质,所述赖氨酸残余基出现在所有蛋白质的30-50%上,特别是组蛋白、p53、微管蛋白和肌球蛋白。使用乙酰化蛋白的专有混合物来产生高度强健的抗体,该抗体已被证明在IPWBChIPIF应用中识别广泛的乙酰化蛋白。这种抗乙酰赖氨酸抗体与其他市售抗体相比具有许多优点,如下所示。

    已验证的应用程序

    使用乙酰赖氨酸抗体的蛋白质印迹

    细胞骨架的抗乙酰赖氨酸抗体类别#AAC01识别0.005ng化学乙酰化的BSA,并且在灵敏度上与其他市售抗体相当。与其他抗乙酰赖氨酸抗体不同,该抗体与非乙酰化BSA没有显示出交叉反应性。要查看完整的蛋白质印迹比较,请参阅优化方案或产品数据表。

    乙酰赖氨酸蛋白质印迹

    使用乙酰赖氨酸抗体的免疫沉淀

    AAC01IP组蛋白的能力与其他市售抗体进行比较。Cytoskeley的抗乙酰赖氨酸抗体为IP应用提供了明显的优势。每个试管足以进行大约20IP测定。要查看完整的免疫沉淀比较,请参阅优化方案或产品数据表。

    乙酰赖氨酸免疫沉淀

    使用乙酰赖氨酸抗体的免疫荧光

    将未经处理(顶部)或用TSA5mM12小时)处理(底部)的人表皮样癌A431细胞按本方法所述染色。乙酰化的细胞质和细胞核蛋白在绿色荧光中可见。注意,与未处理的对照相比,TSA处理的样品中乙酰化微管网络清晰可见。荧光核强度表明核中乙酰化蛋白的丰度很高。要查看完整的免疫荧光方案,请参阅优化方案或产品数据表。

    乙酰赖氨酸IF

    使用乙酰赖氨酸抗体的ChIP

    染色质由未处理或TSA处理(5mM4小时)的A431细胞制备。简言之,用1%甲醛固定细胞10分钟,并通过使用抗乙酰基抗体(1:100稀释)免疫沉淀酶切染色单体。通过引物对扩增管家基因GAPDH的启动子区,并通过2%琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物。要查看推荐的ChIP协议,请参阅优化协议或产品数据表。

    蛋白质乙酰化背景

    蛋白质的乙酰化可以作为共翻译或翻译后修饰(PTM)发生(1)。共翻译乙酰化发生在大约85%的哺乳动物蛋白质的N-末端,它是不可逆的,被认为在蛋白质的稳定性、定位和合成中很重要(1)。翻译后乙酰化发生在赖氨酸残基的ε氨基上,作为一种可逆且高度动态的PTM,已知其是多种细胞事件的关键调节因子,包括染色质结构、转录、代谢、信号转导和细胞骨架调节(2-3)。迄今为止,已有4000多种蛋白质被鉴定为PTM乙酰化的靶标,这与细胞前体中的磷酸化相当(3)。抗体AAC01检测乙酰赖氨酸PTMs

    乙酰赖氨酸亲和珠-AAC03

    乙酰赖氨酸亲和珠

    Cytoskeley提供两种类型的乙酰赖氨酸亲和珠,Cat#AAC02珠和Cat#AAC03珠。这两种试剂都由与G蛋白珠共价连接的小鼠抗乙酰赖氨酸抗体组成,并且都富集了广泛的乙酰化蛋白。AAC02珠粒和AAC03珠粒可以组合以提供更广泛的乙酰化蛋白质富集谱(Cat#AAC04珠粒是AAC02珠与AAC03珠的1:1组合)。

    AAC02珠相比,AAC03珠具有重叠但独的特异性,在检查特定靶蛋白时可能优于AAC02珠,请参阅详细方法和验证应用程序以获取示例。由于乙酰化通常只占总靶蛋白的很小百分比,因此使用优化的试剂对成功至关重要。当检查新的感兴趣蛋白质(POI)的乙酰化状态时,建议分别尝试AAC03珠和AAC02珠,以确定哪种试剂适合y

    已验证的应用程序

    应用1:检测目标POI中的乙酰化变化

    AAC03珠已被证明是乙酰化EGFRRhoGDI靶标POI免疫沉淀的优良试剂(图1)。在HDAC抑制剂存在的情况下,AAC03-IP显示EGFRRhoGDI的乙酰化分别增强11.3倍和2.5倍。而AAC02 Bead分别表现出较弱的8倍和1.1倍的增长。

    1图例:AAC03珠粒和AAC02珠粒(50µl珠浆)和1:1混合物(各25µlAAC04珠粒用于脱乙酰酶抑制剂[TSA1µM)和烟胺(1mM]处理(+)或未处理(-)的Cos-7细胞的乙酰化蛋白IP 6小时。使用抗EGFR和抗RhoGDI抗体进行蛋白质印迹分析,并使用LiCor-Empiria软件对信号进行定量。还进行IP测定,并对小鼠IgG对照珠的信号进行定量(印迹未显示)。每个IP使用1 mg裂解物。

    应用2:总乙酰赖氨酸图谱的免疫沉淀

    AAC03珠显示出强大的总乙酰基IP图谱,与AAC02珠具有重叠但特异性图谱。AAC03珠可以单独使用,也可以与AAC02珠组合使用来研究乙酰基组。

    2图例:使用AAC02珠、AAC03珠和AAC04珠(50µl珠浆)对用脱乙酰酶抑制剂[TSA1µM)和烟胺(1mM]处理(+)或未处理(-)的Cos-7细胞的乙酰化蛋白进行IP处理6小时。用AAC03-HRP抗体(1:3000)洗脱并通过蛋白质印迹分析富集的乙酰化蛋白的总图谱。使用小鼠IgG珠作为非特异性结合的对照(Cat#CIG02)。每次IP测定使用1 mg Cos-7裂解物

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