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    Transnetyx冷冻细胞相关问题解答

    发布时间: 2023-04-20  点击次数: 362次

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    冷冻细胞

    1.你们提供冷冻细胞系吗?

    目前,我们不提供冷冻细胞,也没有冷冻细胞的协议。您可以要求将闪存冻结作为一种自定义选项,以收取额外的处理费。

    分解

    2.海马或皮层细胞的生存能力是否取决于解离的方法?你喜欢机械解离还是酶解离?

    是的,木瓜蛋白酶可以获得更高的活产率(参见J Neurosci Meth 71:143),但表面蛋白的消化是不可避免的。在短期内(不到4天),这是一个令人担忧的问题。从长远来看,这可能并不重要。使用火抛光的9英寸玻璃移液管可获得更高的生存能力,而使用蓝色塑料移液管端可获得更低的可见性。对于E18组织,为了快速和简单,我们使用了机械。

    3.你用酶来制备皮层培养物吗?

    为了获得更高的产量,我们使用在不含B27®Hibernate®E-Ca中稀释的2mg/mL木瓜蛋白酶溶液。该溶液应在30摄氏度的水浴中培养10分钟。不应向该溶液中添加EDTA、巯基乙醇或半氨酸HCl等其他化学物质。有关更多信息,请参阅我们的初级神经元细胞培养方案。

    4.为什么您推荐不含B27®Hibernate®E-Ca与木瓜蛋白酶进行最佳解离?

    钙能促进粘附。因此,去除钙可以促进神经元的解离。为了提供细胞粘附蛋白作为木瓜蛋白酶的主要底物,省略了B27®,这样B27®中的蛋白质就不会竞争底物。

    文化

    1.原代细胞会增殖吗?如果会,你能将它们传代多少次?

    原代细胞不增殖,不应传代。如果传代,只有30%的细胞存活,并且细胞不能再次传代。

    2.你知道每小瓶组织能提供多少星形胶质细胞吗?

    星形胶质细胞的数量是细胞数量的20%。当生长神经元培养物时,不含血清的培养基(NbActiv1用于培养少于2%的星形胶质细胞。这抑制了没有AraC的神经胶质细胞生长。当生长星形胶质细胞时,培养基中含有血清(NbAstro - Neurobasic®/马血清/氨酰胺最大残留量™可用于使星形胶质细胞在1.52周内汇合。

    3.什么时候应该添加AraC作为星形胶质细胞有丝分裂抑制剂?

    Neurobasic®/B27®/GutaMAX中™ 我们推荐的培养基,您根本不需要添加AraC。该培养基不像血清那样人工刺激星形胶质细胞增殖。

    4.星形胶质细胞是否增殖?如果增殖,它们可以传代多少次?

    星形胶质细胞确实会增殖并且可以传代。我们的E18星形胶质细胞可以成功传代4-5次。

    5.海马神经元什么时候表现出兴奋性毒性?

    据我们所知,乙酰碱在任何年龄都是无毒的。

    E18海马培养7天开始,氨酸的毒性最大。皮质神经元可能提前12天。

    6.我的文化被污染了。它们一开始看起来很好,但现在介质是多云的黄色,有许多1-3微米长的相暗体。

    至少有5种可能的污染源(假设培养箱中的其他培养物没有被污染,并且培养箱底部的加湿水是干净的):

    培养皿本身可能是污染源。为了排除这种情况,将新鲜过滤的培养基加入另一个培养容器中。如果介质变黄或浑浊,则容器受到污染。

    粘性基材。这很常见。您可以将新鲜过滤的培养基放在准备好的基质上,以寻找这种污染源。

    培养基本身或其中一种添加剂(如氨酸盐)。这很常见。请确保在您的介质的未涂覆井中进行单独的测试,并由我们提供。

    看似随机或低水平的污染可能来自于朝着开放文化的方向说话甚至呼吸。此外,无菌罩和培养箱之间的空气不是无菌的,大多数培养容器都没有密封。如果从罩子到培养箱有很长的距离,你可以把培养物放在用70%乙醇冲洗过的塑料食品容器里。

    组织。尽管我们对我们提供的培养基进行无菌测试,但组织本身无法进行测试。如果您能提供证据证明您的组织按时到达,并在使用前储存在4摄氏度,并且排除了上述4种可能性,请致电我们进行一次性更换。通常,我们的经验是,您的样本是本周我们所有货物中一被污染的样本,所以请理解我们需要进行上述测试。

    7.我想知道你能不能给我建议,我需要培养多少细胞才能获得足够的蛋白质来进行几次蛋白质印迹?即,多少个细胞等于20-50微克的蛋白质?

    根据PatelBrewer2003)的研究,在培养基中生长一周的18000个细胞中,每个细胞含有大约6μg的蛋白质。因此,3000个细胞/ug蛋白质。需要大约50g蛋白质的蛋白质印迹提取物将需要大约150000个细胞。

    排序

    1.如何下采购订单?

    可以使用我们的网站下单。创建帐户后,您可以通过采购订单或信用付款。

    2.您的付款条件是什么?

    Transnetyx Tissue的标准付款条件是净30

    3.你们有多单位折扣吗?

    是的,我们的一些目录有多单位折扣。要获得折扣,商品必须同时发货。

    4.你们的运输时间表是什么?

    我们可以在收到订单后24小时内发货。E18和成年大鼠和小鼠组织在周二、周三和周四发货。周一至周四运送媒体和其他物资。对于定制或特殊订单项目,我们需要2-3周的订单交付时间。

    5.你们在国际上发货吗?

    Transnetyx Tissue通过联邦快递提供国际货运服务。如果您的公司有联邦快递账户,他们想收取运费、关税和税款,请在订单上注明。否则,运费和关税将包含在您的发票中。

    所有国际货运安排在周一的Media或周二的Tissue。这样可以留出通关时间。请至少提前一个工作日提交订单,以适应此运输时间表。请确保提交任何特定于您所在国家的海关文件。我们只提供标准的海关文件,对因文书工作不足而造成的海关延误不承担责任。

    其他

    1.我是否应该意识到任何道德问题?

    目前的程序由机构动物使用和护理委员会批准。

     

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