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    Vectorlabs核酸印迹工作流程

    发布时间: 2022-11-25  点击次数: 394次

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    核酸印迹工作流程核酸(脱氧核糖核酸或核糖核酸)的纯化、角色塑造和鉴定往往需要在印迹应用中对目标进行分析。核酸通常用凝胶电泳按大小分离,然后转移到细胞膜上,用互补探针进行检测。核酸印迹应用需要高特异性。由于目标序列的特性,所使用的探针对提供这种特异性大有帮助,但灵敏度也取决于目标的丰度和可用于检测的试剂的质量。载体实验室支持您的研究,提供了广泛的试剂和工具包的核酸检测和分析的印迹。步骤1贴标签标记用物素、高辛DIG)、DNP或荧光素等标签标记核酸探针,使用一步直接方法、基于硫醇的间接标记或特定的5'3'末端标记技术。标签的选择取决于许多因素,包括所需的灵敏度和可用于检测的仪器。有关更多信息,请观看我们的视频PHOTOPROBE物素试剂盒进行核酸标记" 物素和高辛标记试剂 ChromaLink 物素和高辛含有紫外线可追踪的发色团,使蛋白质和核酸的物素化和高辛化能够重现。ChromaLink 发色团可以让你通过一个简单直接的紫外线扫描来量化结合,这需要几分钟,而不是几个小时。标记定量不需要 HABA/亲和素和荧光报告分析所需的标准曲线。ChromaLink 物素和高辛还含有一个 PEG3间隔物,以提高溶解度,减少空间位阻和聚集的蛋白质观察常规试剂。ChromaLink 标记试剂可在胺反应性 NHS 酯中使用,ChromaLink 物素也可作为巯基反应性马来酰亚胺使用。QuantTag(数量标记)物素定量试剂盒BDK-2000SKU单位尺寸价格数量BDK-2000 1套件请咨询我们的经销商1.如何申请报价或批量定价?跳到图像库的末尾跳到图像库的开头描述规格套件组件文件相关产品引文(18)技术信息描述QuantTag物素试剂盒(BDK-2000)旨在测定溶液中游离物素的量或附着在核酸、蛋白质或其他大分子上的物素分子的数量。该试剂盒可用于准确确定物素标记分子过程的标记效率。我们一起突破 TMCat。没有。储存 BDK-2000室温储存工具包。物素定量试剂盒设计用于测定溶液中游离物素的含量或附着在蛋白质、核酸或其他大分子上的物素的数量。试剂盒试剂与游离或结合的物素发生化学反应,产生可用分光光度计定量的有色产物。吸光度在可见光中测量,允许使用塑料试管或微量滴定板。分析可以使用这两种方案中的任何一种。方案的选择将取决于测定中使用的试管的大小。待测试的样品(含有未知数量的物素)与试剂盒试剂以及含有已知数量的物素的标准反应。将已知样品的吸光度读数绘制成标准曲线。测试样品的吸光度位于标准曲线上,表示物素的存在量。产品描述产品容量量标签试剂187.5 mlQuantTag 试剂287.5 mlQuantTag 试剂387.5 mlQuantTag 物素标准1ml: 0.5 mM 该试剂盒含有足够的试剂以使用1ml 方案(包括每个的标准曲线)进行25次测定或使用0.1 ml 方案进行250次测定。? 避免接触皮肤协议可以使用两种方案中的任一种进行测定。选择方案将取决于测定中使用的反应杯的大小。1 ml含量测定:1ml分析方案适用于1ml试管。反应可以直接在反应杯中进行,也可以进行并在测量吸光度。1.按如下方法制备QuantTag工作溶液:将0.5ml每个样品的试剂10.5 ml试剂250µl试剂3。(黄色试剂3在与试剂12.)所需总量为6 ml(标准品)加1 ml测试样品的。工作溶液最多可使用八小时。2.按如下步骤制备物素标准品:添加1µl2µl5µl,将10µl20µl物素标准溶液加入五个试管中的每一个。这些标准将包含0.5 nmol1 nmol2.5 nmol5 nmol10nmol物素。在第六个反应杯中,不添加物素(这个将用于归零"分光光度计)。3.调整物素化分子的浓度物素的数量可能落在标准曲线的范围内。可运行两种不同浓度或体积的试样同时(见注释A4.向反应杯中加入20µl或更少的测试样品。最常见的缓冲液不会干扰测定(见注释B)。然而可通过包括含有在类似溶液中的未丁基化测试分子(例如DNA或蛋白质)作为物素化样品。该对照品的吸光度读数可以然后从测试样品的吸光度读数中减去。5.向每个反应杯中加入1 ml QuantTag工作溶液并在室温下孵育30分钟。有色反应产物稳定数小时。6.测量试样和物素标准品的吸光度在535nm处。使用不含物素的标准品,将仪器7.为了测定测试样品中物素的nmol,使用物素用标准值绘制标准曲线X轴和Y轴上的吸光度,如图1注释C所示确定每个物素化分子的物素数量,见注释C规格更多信息单元尺寸1套件应用免疫组织化学/免疫细胞化学、免疫荧光、原位杂交、印迹应用、ELISA、流式细胞术/细胞分离、糖生物学安全标题警告:套件组件盒子里有什么?试剂187.5 ml*试剂287.5 ml*试剂38.75 ml*物素标准溶液(1ml0.5mM)该试剂盒含有足够的材料,可使用1ml方案进行25次测定(包括为每一次建立标准曲线)或使用0.1ml方案进行250次测定。*注意:避免接触皮肤和眼睛。如果发生接触,立即用水冲洗。协议可以使用两种方案中的任一种进行测定。选择方案将取决于测定中使用的反应杯的大小。1 ml含量测定:1ml分析方案适用于1ml试管。反应可以直接在反应杯中进行,也可以进行并在测量吸光度。1.按如下方法制备QuantTag工作溶液:将0.5ml每个样品的试剂10.5 ml试剂250µl试剂3。(黄色试剂3在与试剂12.)所需总量为6 ml(标准品)加1 ml测试样品的。工作溶液最多可使用八小时。2.按如下步骤制备物素标准品:添加1µl2µl5µl,将10µl20µl物素标准溶液加入五个试管中的每一个。这些标准将包含0.5 nmol1 nmol2.5 nmol5 nmol10nmol物素。在第六个反应杯中,不添加物素(这个将用于归零"分光光度计)。3.调整物素化分子的浓度物素的数量可能落在标准曲线的范围内。可运行两种不同浓度或体积的试样同时(见注释A4.向反应杯中加入20µl或更少的测试样品。常见的缓冲液不会干扰测定(见注释B)。然而可通过包括含有在类似溶液中的未丁基化测试分子(例如DNA或蛋白质)作为物素化样品。该对照品的吸光度读数可以然后从测试样品的吸光度读数中减去。5.向每个反应杯中加入1 ml QuantTag工作溶液并在室温下孵育30分钟。有色反应产物稳定数小时。6.测量试样和物素标准品的吸光度在535nm处。使用不含物素的标准品,将仪器7.为了测定测试样品中物素的nmol,使用物素用标准值绘制标准曲线X轴和Y轴上的吸光度,如图1注释C所示确定每个物素化分子的物素数量,见注释C A:对于大多数物素化蛋白质,假设每种蛋白质含有230 nmol物素nmol蛋白质。通常,5–20µl 1 mg/ml物素化溶液当使用1ml测定。对于0.1 ml的测定,通常使用0.5–5µl1 mg/ml溶液充足的一些高浓度的物素化蛋白可能不溶于QuantTag工作溶液。如果物素化蛋白未溶解用QuantTag溶液孵育30分钟后,重复测定具有较低的蛋白质浓度。对于大多数物素化的DNA,假设每10-30个碱基对有一个物素,或每千碱基对33–100个物素。通常,10–20µl 1µg/µl溶液物素化DNA的含量可能在标准曲线的范围内当使用1ml测定时。对于0.1 ml测定,1–5µl 1µg/µl溶液通常就足够了。注B:发现以下缓冲液和化合物干扰QuantTag分析(通过添加20µl 100 mM进行测试溶液至1ml QuantTag工作溶液):叠氮EDTA磷酸盐双Tris EPPS管道双三丙烷HEPES Tricine硼酸盐咪唑三碳酸酯MES柠檬酸盐MOPSC:为了确定每个物素化分子的物素数量,首先确定所测试的物素化分子的量,通过使用以下等式:A x B x 1000C=物素化分子的nmol哪里:A=加入的测试分子浓度(µg/µlB=加入的测试分子体积(µlC=测试分子的分子量(µg/µmol)了解测试样品(n)中物素的nmoles(来源于标准曲线)和测定中测试分子的nmolesm)以计算分子上物素的数量。

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