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    Cellutron稳定的细胞系开发

    发布时间: 2022-08-29  点击次数: 101次

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    稳定的细胞系开发

    Cellutron 提供定制的高质量稳定细胞系服务,以优化生产您感兴趣的蛋白质。基因到细胞服务包括基因合成、靶向载体构建、细胞培养、转染、稳定细胞系的药物选择和转基因表达的确认。凭借先进的载体技术,Cellutron 能够在多种细胞类型中产生稳定的细胞系,包括小鼠和人类干细胞以及 iPS 细胞。

    稳定细胞系-G      稳定细胞系-R

     在荧光报告基因的初始转导两个月后,稳定转染的小鼠胚胎干细胞表达 GFP RFP

    亲代细胞系:人和小鼠胚胎干细胞和 iPSHEK293CHOBHKNS0 细胞、H9C2 或细胞系。

    稳定细胞系产生的过程和时间线:

    1. 哺乳动物细胞表达载体的基因合成与构建           

    进行优化的基因合成并将基因克隆到哺乳动物细胞表达载体中(1 周)

    2. 转基因表达分析      

    用表达载体转染亲本细胞系并通过 RT-PCR/Western blot/ELISA 评估转基因的表达(1 周)

    3. 筛选稳定转染子

    对*级克隆进行稳定性筛选并评估最终细胞系的 10 次传代。(约 4 周)

    向客户提供 2 瓶*级稳定克隆

    请联系客服索取申请表。

    肌节 α 肌动蛋白的免疫细胞化学染色

     

    心肌细胞在 60 mm 板中培养

    1X PBS 冲洗细胞,在室温下用 PBS 中的 3.7% 甲醛固定细胞 10 分钟,然后在 70% ETOH 5 分钟,用 PBS 中的 0.2% Triton-X 100 孵育 5 分钟,然后用 1X PBS 洗涤细胞两次5分钟。

    1ml 2% BSA PBS 孵育细胞 30 分钟。在板中加入针对肌节 α 肌动蛋白 (Sigma, Cat#: A2172) 的原代小鼠抗体 1 小时,室温,O/N4°C

    1X PBS 清洗细胞 3 次,每次 10 分钟。

    HRP 偶联的二抗在室温下针对小鼠孵育 1 小时

    1X PBS 清洗细胞 3 次,每次 10 分钟。

    1 ml DAB 溶液孵育 10 分钟。用 1X PBS 清洗。

    *在您需要之前准备新鲜的 DABSigmaCat#D8001)溶液:

    * 37 C 下解冻 DAB 原液,直到不再浑浊。将 5ul DAB 原液添加到 1ml 1X PBS 中。加入 1ul 30% H2O2 并充分混合。

    在显微镜下检查染色的细胞。

    成人心肌细胞分离

    成年大鼠/

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