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    Favorgen下FavorPrep™ Tri-RNA 试剂的操作使用

    发布时间: 2021-07-07  点击次数: 579次

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    FavorPrep™ Tri-RNA 试剂

     

    FavorPrep™ Tri-RNAReagent 是一种来自改进的苯酚和异硫氰酸胍 (GSN) 方法的试剂,用于单步 RNA 分离。在样品匀浆或裂解过程中,Tri-RNA 试剂保持 RNA 的完整性,同时破坏细胞和溶解细胞成分。 Tri-RNA 试剂的组成包括苯酚和 GSN 的单相溶液。生物样品在 Tri-RNA 试剂中匀浆或裂解,匀浆通过添加氯仿、涡旋和离心分离成水相和有机相。 RNA 仅保留在水相中(透明的上相),DNA 保留在中间相中,蛋白质保留在有机相中(红色)。通过加入异丙醇从水相中沉淀 RNA 并溶解/浓缩。如果需要,可以分别用乙醇和异丙醇从中间相和有机相中依次沉淀 DNA 和蛋白质,然后溶解/浓缩。

     

    特征

     

    ★ 一步法从组织、细胞、细菌、植物、酵母和生物体液中分离总RNA

     

    ★ 整个RNA分离过程不到1小时。

     

    ★ 纯化后的RNA可应用于:RT-PCRNorthern杂交、RNase保护、Poly-A+RNA筛选、差异展示和微阵列分析。应用

     

    100 次使用 储存: 4℃ 棕色玻璃瓶中,供日常使用

     

    程序:

     

    1. 1 ml Tri-RNA Reagent 加入 100 mg 组织(或从最多 10 ml 血液或 106 个培养细胞中沉淀的血液 RNA 病毒,或 10 cm2 培养板)

    2. Tri-RNA Reagent 中使用玻璃 Teflon Polytron 匀浆器匀浆组织样品(培养细胞可以通过重复移液裂解;浓缩的血液 RNA 病毒可以通过剧烈涡旋裂解)。

    3. 将匀浆在室温下放置 5 分钟。

    4. 加入 0.2 ml 氯仿(未提供)并剧烈混合。

    5. 12,000 rpm 离心 3 分钟以分离各相,RNA 在透明的上层水相中。

    6. RNA 相转移到干净的管中。

    7. 加入 1x 体积的异丙醇,涡旋以沉淀 RNA,在室温下放置 10 分钟,然后以 12,000 rpm 离心 15 分钟。

    8. 去除上清液。

    9. 0.5 ml 冰冷的 70% 乙醇清洗 RNA 沉淀,12,000 rpm 离心 1 分钟,小心除去上清液。

    10. 短暂旋转以确保 RNA 沉淀沉淀到管的侧壁,然后小心地去除任何残留的上清液,不要接触 RNA 沉淀。

    11. RNA 重悬在少量 TEpH8.0

     

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