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    Encorbio计算要称出多少硫酸铵才能制成特定饱和度的溶液

    发布时间: 2021-07-06  点击次数: 1337次

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    Encorbio计算要称出多少硫酸铵才能制成特定饱和度的溶液

    硫酸铵计算器:

     

    硫酸铵沉淀是分离蛋白质的一种简单而有效的方法。它基于这样一个事实:在高盐浓度下,蛋白质不聚集的自然趋势被克服,因为表面电荷被中和。电荷中和意味着蛋白质会倾向于结合在一起,形成大的复合物,因此很容易通过温和的离心沉淀出来。由于每种蛋白质都会在特定的盐浓度下开始聚集,因此这种方法提供了一种在混合物中富集特定蛋白质的简单方法,例如用于从血清中分离免疫球蛋白。通过简单地加入等体积的饱和硫酸铵,很容易使制剂达到 50% 的饱和度。制作具有更高饱和度百分比的溶液是一个更大的问题,因为您可能必须添加非常大量的饱和硫酸铵。向样品中添加固体硫酸铵通常更容易,但计算添加量相当耗时。下面的程序计算您需要向特定体积的溶液中添加多少固体硫酸铵才能在特定温度下获得特定百分比饱和度;

    以毫升为单位输入溶液的起始体积:      

    所需的饱和百分比硫酸铵:      

    输入硫酸铵的起始饱和百分比:      

              

     

    硫酸铵沉淀方案:您可以将蛋白质制剂与 100% 硫酸铵溶液混合,或者您可以使用上述程序添加固体硫酸铵以达到所需的百分比浓度。典型的方案如下:

     

    1. 制备饱和硫酸铵溶液,例如约 550g 配制成 1L 蒸馏水。轻轻加热以溶解所有硫酸铵,并在磁力搅拌器上冷却至工作温度。应形成硫酸铵晶体,并告诉您溶液已*饱和。

    2. 向样品中加入适当体积的饱和硫酸铵或固体硫酸铵以获得所需浓度。搅拌 1 小时以*平衡。

    3. 10,000g 离心 15 分钟以沉淀蛋白质。

    4. 加入更多的饱和硫酸铵或固体硫酸铵进行下一次浓缩,重复搅拌和离心。

    5. 将沉淀溶解在 PBS 中以分析蛋白质。根据您的下一步计划,可能需要透析硫酸铵。

    程序是如何工作的: 硫酸铵是在这样的饱和硫酸铵极易溶于水是在25 4.1M溶液Ô C4.06M20 Ô C3.97M10 Ô C3.93M4 ö C3.9M0 o C. 硫酸铵 (NH 4 ) 2 SO 4的分子式和分子量为 132.14,因此饱和发生在 25 o C 时为 541.8 g/L20 o C时为 536.49 g/L 524.6 g/L L 10 o C519.1 g/L 4 o C 515.35 g/L 0 oC、硫酸铵的比容也与温度有关,但约为0.54ml/g,也就是说在水溶液中加入1g硫酸铵,体积会增加0.54ml左右。所以如果你加入的量你需要在 25 o饱和 1L 的水C 1L 水,也就是 541.8 克硫酸铵,你不会得到饱和溶液。1L 水加 541.8g 硫酸铵得到 1L 541.8 * 0.54 mls,等于 1,293 mls 最终体积,因此溶液将 1,000/1,293 * 100% 饱和,约为 77%。例如,如果您想通过添加固体硫酸铵来制备 25% 50% 的溶液,该计算也并不像您想象的那么简单——因为硫酸铵提供了如此多的额外体积,您需要更多的固体铵硫酸盐将溶液从 25% 饱和度提高到 50% 饱和度,而不是将其从 0% 提高到 25% 饱和度所需的饱和度。因此,大多数人使用表格或列线图来计算要添加多少硫酸铵。您可以在许多地方找到表格来执行此操作(例如,请参阅Englard Seifter Methods in Enzymology 182 卷,1990 年出版,另见 ScopesRK“Protein Purification:Principles and Practice”Springer-Verlag New York1994)。或者您可以使用我们*的(据我们所知)在线程序,它可以方便地为您计算所需的金额。这些表格可以很好地获得您需要添加到 1 升或 100 毫升溶液中的数量,然后您通常必须从那里计算您实际拥有的体积。我们的程序还会考虑您正在使用的体积,从而节省您的进一步计算,以便您可以直接进行平衡。我们的程序使用等式;

    G = Sat(M 2 -M 1 )/(SatM-(SpecVol/1000*132.14*SatM*M 2 ))

     

    其中 G = 要添加的硫酸铵的重量,以克/升为单位,Sat 是硫酸铵饱和溶液中的克数/升,M 2 = 要达到的摩尔浓度,M 1 = 起始摩尔浓度,SatM是硫酸铵饱和溶液的摩尔浓度。SpecVol是硫酸铵的比容,即1g加入水溶液的体积量,约为0.54mlsSatSatM SpecVol 都随温度变化,程序会考虑在内。数字 132.14 是硫酸铵的分子量。所使用的方程和各种因子基于Coligan 等人编辑,John Wiley (1998) 编辑的当前蛋白质科学协议的第 A.3F.1 节增补 13 中发表的那些。

     

    这个程序和上面列出的不同出版物可能给出的结果略有不同,那么谁是对的?不同的计算给出不同结果的原因有很多,所以最好坚持一个你知道有效的表格或协议,因为你是否真的有 50% 50.8% 的饱和硫酸铵并不是那么重要,只要您可以重复地进行适合您正在做的任何事情的任何浓度。

     

     

    免责声明:该程序的构建主要是为了为世界各地忙碌的研究人员节省时间。我们希望您觉得它有用,并且我们相信它是准确可靠的。但是,对于因使用该程序而可能出现的任何问题,我们概不负责。

     

    小鼠髓鞘碱性蛋白单克隆抗体

    Cat# MCA-7G7

      髓鞘碱性蛋白 (MBP) 是神经系统中围绕轴突的髓鞘的主要蛋白质之一。由于它具有相对较低的分子量和高丰度,因此蛋白质序列是在 30 多年前从纯化的蛋白质中确定的 (1)。这种蛋白质是由中枢和神经系统中的少突胶质细胞产生的,因此 MBP 的抗体是这种细胞类型的良好标志物。在外周神经系统中,MBP 由髓鞘化雪旺氏细胞表达,因此该抗体可用于识别培养物或切片材料中的这些细胞。在中枢神经系统中,四种不同形式的蛋白质由单个基因的交替转录制成,蛋白质产物在人类中的分子量分别为 21.520.518.5 17.2kDa。啮齿动物的单个基因也产生 4 种不同的蛋白质,但剪接机制不同,产生四种形式,大小略有不同,21.518.517 14kDa。一些兴趣集中在 MBP 作为涉及多发性硬化症小鼠模型 (MS, 3) 和人类患者 (4) 的潜在重要自身抗原。释放到血液和脑脊液中的 MBP 的检测具有作为 MS 脱髓鞘和轴突损失以及其他相关损伤和疾病状态(例如 5)的替代生物标志物的一些潜力。

          MCA-7G7 抗体是针对从牛脑中生化纯化的 MBP 制剂制备的。它可用于识别神经细胞培养物中的少突胶质细胞和雪旺氏细胞,在切片材料中显示髓鞘和髓鞘细胞,并探测蛋白质印迹以寻找 MBP 基因产物。该抗体对醛固定也相当不敏感,因此可用于石蜡切片的免疫组织化学。MCA-7G7 抗体结合所有四种 CNS MBP 同种型,因此抗体的表位位于所有四种基因产物共享的核心中。进一步作图将表位定位到肽 TPPPSQGKG,人类 21.5kDa 序列的氨基酸 125-133。数据是用重叠肽产生的,这表明最后四个氨基酸 SQGKG 可能是表位的关键元素。该肽在大鼠、小鼠、牛和许多其他物种中具有不变性,因此该抗体将具有广泛的适用性。相比之下,我们的替代小鼠单克隆MCA-7D2仅结合 21.5kDa 18.5kDa 大鼠 MBP 同种型,但结合所有牛和人同种型,将表位映射到 AEGQRPGFGYGGRASDYKSAHKGFKGVDAQGTLSKIFKLG,人类 21.5kDa 序列的氨基酸 145-184。人类和大鼠中四种 CNS MBP 同种型的序列比对可从此处下载。鼠标选择左侧的图像以获得更大的视图,并在附加信息”选项卡上选择更多信息。

     

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