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兔多克隆抗体一般制备流程与反应原理分析

发布时间： 2020-08-13　　点击次数： 1250次

　　抗体的主要功能是与抗原(包括外来的和自身的)相结合，从而有效地清除侵入机体内的微生物、寄生虫等异物，抗体(antibody)是一种应答抗原产生的、可与抗原特异性结合的蛋白质。每种抗体与特定的抗原决定基结合。这种结合可以使抗原失活，也可能无效但有时也会对机体造成病理性损害，如抗核抗体、抗双链DNA抗体、抗甲状腺球蛋白抗体等一些自身抗体的产生，对人体可造成危害。

　　兔多克隆抗体用PUMA作为抗原刺激兔机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白。PUMA Rabbit Polyclonal Antibody是通过分子生物学方法构建了重组PUMA的表达载体,并诱导实现PUMA抗体的大量表达。该重组蛋白以可溶性形式存在,经亲和柱纯化后对家兔进行免疫,得到PUMA抗体(兔多抗)。

　　PUMA刺激机体，产生免疫学反应，由机体的浆细胞合成并分泌的与抗原有特异性结合能力的一组免疫球蛋白，这种与抗原有特异性结合能力的免疫球蛋白就是抗体。一般而言，抗体按靶位点不同主要分为单克隆抗体和多克隆抗体，由多个B淋巴细胞克隆产生的，受到多种抗原决定簇刺激并可以与多种抗原表位结合的抗体就是多克隆抗体。

　　兔多克隆抗体一般制备流程：*抗原的准备→兔子的免疫→效价检测和终放→抗体亲和纯化→抗体的浓缩和保存。PUMA的表达受肿瘤抑制基因p53的调节。PUMA参与由多种信号诱导的p53依赖性和非依赖性细胞凋亡，并且受转录因子调节，而不是通过翻译后修饰。活化后，用PUMA抗凋亡相互作用的Bcl-2家族成员，从而释放Bax蛋白和/或Bak的其然后能够发送信号的细胞凋亡的线粒体。继线粒体功能障碍时，胱天蛋白酶级联被激活，终导致细胞死亡。

　　生化研究表明PUMA与抗凋亡Bcl-2家族成员如Bcl-xL，Bcl-2，Mcl-1，Bcl-w和A1相互作用，抑制它们与促凋亡分子Bax和Bak的相互作用。当它们的抑制被解除时，它们导致Bax的易位和线粒体功能障碍的激活，导致线粒体凋亡蛋白细胞色素c，SMAC和凋亡诱导因子(AIF)的释放，导致胱天蛋白酶活化和细胞死亡。因为PUMA对结合Bcl-2家族成员具有高亲和力，另一个假设是PUMA直接激活Bax和/或Bak，并且通过Bax多聚化触发线粒体易位并且其诱导细胞凋亡。然而，各种研究表明，PUMA不依赖于与Bax/Bak的直接相互作用来诱导细胞凋亡。

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