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延伸阅读

SARS-CoV-2病毒

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细胞因子风暴和免疫反应

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凝血

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SARs-CoV-2 感染如何导致多器官衰竭?

的严重病例中观察到多个器官受损。据报道,脑部炎症、癫痫发作和中风以及嗅觉丧失。除了血凝块形成外,SARS-CoV-2 还可能导致心脏病发作和心脏炎症。肝脏和肾脏也显示出严重损伤和衰竭的迹象。下胃肠道富含 ACE2 受体, 的症状可能包括腹泻。尽管受 影响的器官系统清单越来越多,但仍有很多需要调查的地方。目前尚不清楚在这些器官系统中观察到的损伤是由于直接的病毒损伤还是免疫系统过度活跃(细胞因子风暴)、凝血异常或给药副作用的间接影响。

补体系统如何促进 的发病机制?

补体途径包括 30 多种蛋白质,是先天免疫和宿主防御系统的重要组成部分。在病毒感染和细胞因子信号传导引起内皮损伤后,补体途径的产物在肺泡-毛细血管界面处受到刺激。补体途径激活组织因子表达以及血管性血友病因子 (VWF) 和血小板因子 V 的分泌,它们是凝血途径的重要组成部分。已知补体途径的过度激活会促进过度炎症、内皮细胞损伤、血栓形成、血栓形成倾向,并最终导致多器官系统衰竭。

对于补体系统如何导致在 中观察到的凝血异常,有许多建议的解释,例如 NET 形成、补体和凝血途径之间的破坏性反馈回路。内皮损伤、补体激活、中性粒细胞失调和高凝的综合影响很可能共同加剧了 的严重程度。尽管有许多关于补体途径、凝血级联反应和炎症之间的串扰的假设,但在 发病机制领域,它们如何导致血栓形成尚不清楚。

细胞因子风暴会引起哪些血管损伤?

细胞因子风暴会导致血管内皮细胞损伤和细胞死亡。因此,发生了一些导致血栓形成和其他 并发症的事件:

凝血和补体激活:补体系统在内皮细胞损伤后被激活,从而触发凝血级联反应。凝血途径对于修复受损的血管组织和减少失血至关重要。然而,当补体通路未得到适当调节时,可能会出现高凝状态,从而导致内皮损伤并增加血栓形成的风险。

毛细血管渗漏综合征:当血浆从毛细血管流入邻近组织导致低血压、水肿、器官损伤和急性呼吸衰竭时,就会发生毛细血管渗漏综合征。

红细胞吞噬作用:红细胞吞噬作用是红细胞的破坏,这可能导致贫血。这是由高水平的细胞因子介导的巨噬细胞活化引起的。

紧急粒细胞生成:全身细胞因子升高与低血小板数量和中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞的快速产生有关。这些粒细胞和单核细胞被迅速动员以迁移到炎症和感染部位,以发挥防御作用。这也可能导致来自自然杀伤细胞和 T 细胞的促炎细胞因子的产生增加。

免疫血栓形成:中性粒细胞释放中性粒细胞胞外陷阱 (NET) 以捕获病原体并形成血栓,称为免疫血栓形成。免疫血栓形成进一步放大细胞因子的产生,这可能导致广泛的血栓形成。

弥散性血管内凝血:血栓形成后可能会破坏血管系统止血,这可能会导致弥散性血管内凝血 (DIC)DIC 是血栓的形成,阻塞全身的小血管,可导致呼吸急促、低血压、多器官衰竭和死亡。

研究期间如何使用血清学 SARS-CoV-2 抗体测试?

SARS-CoV-2 抗体阳性结果表明个体已暴露于 SARS-CoV-2 并对其产生了免疫反应。它并不表明存在活跃的 SARS-CoV-2 感染,而是表明已经发生了接触。追踪 SARS-CoV-2 抗体水平对于人群研究至关重要,以识别病毒在人群中的传播、抗体水平如何随时间变化以及数据如何与免疫相关。血清学研究还将提供有关 SARS-CoV-2 疫苗有效性的信息。疫苗的目标是促进身体制造针对 SARS-CoV-2 病毒的抗体。能够测量响应疫苗递送的抗体水平可能表明疫苗的功效。重要的是要记住,可以针对 SARS-CoV-2 病毒的不同抗原开发抗体,例如针对 S 蛋白或 N 蛋白。检测不同的病毒蛋白将有助于确定免疫和病毒功能的机制。抗 SARS-CoV-2 抗体水平与 疾病严重程度相关,这表明症状严重者的免疫反应升高。

针对 SARS-CoV-2 的抗体是否赋予保护性免疫?

抗体通过在病毒侵入细胞之前中和或破坏血液或粘膜中的病毒来发挥作用。因此,测量血液中的抗体水平可以作为免疫保护的指标。最近的研究表明,血液中针对 SARs-CoV-2 的抗体数量随着时间的推移而迅速下降。目前尚不清楚抗体保护是否在水平低或无法检测到时发生,或者针对 SARS-CoV-2 的抗体是否会提供防止再次感染的保护。需要更多的长期监测和免疫学研究。

然而,T细胞免疫有望提供长期的免疫保护。T细胞通过靶向并杀死被病毒感染的细胞来发挥作用。暴露于病毒后记忆 T 细胞的形成将随着时间的推移传递病毒特异性免疫反应能力。需要更多的研究来调查对 SARS-CoV-2 的长期免疫反应。

SARS-CoV-2 抗体的免疫球蛋白类别之间有什么区别?

免疫球蛋白是由浆细胞产生的糖蛋白,对于抗体识别和结合抗原很重要。每个同种型具有不同的效应子功能。SARS-CoV-2 特异性抗体主要存在于 IgMIgA IgG 免疫球蛋白类别中。

IgM 是在 SARS-CoV-2 感染后首先检测到的主要反应抗体。

IgA 分泌到呼吸道上皮和胃肠道的眼泪、粘液和唾液中。SARS-CoV-2 特异性 IgA 也可以在血清中进行血清转化以进行检测,并且在针对 SARS-CoV-2 呼吸道病原体的第一道防线中具有效应子功能。IgA 也可以在早期阶段用 IgM 检测到,并且可能比 IgM 显示出更高的诊断敏感性。

IgG 抗体在感染后较晚的时间段被检测到,但在血清中保留的时间最长。

抗体反应,尤其是 IgA,与 疾病进展的相关性是惊人的,需要进一步研究。

针对 SARS-CoV-2 的免疫抗体是如何产生的?

B 细胞是身体产生抗体的细胞,可提供体液免疫反应。B 细胞通过与树突和巨噬细胞免疫细胞接触而遇到抗原。B 细胞在生发中心 (GC) 中形成,其中通过增殖发生克隆扩增,B 细胞进行类别转换重组。免疫球蛋白类别转换对于多样化和增强细胞消除病原体的能力很重要。T 细胞细胞因子的激活诱导 B 细胞进行克隆选择,以富集具有最高抗原结合亲和力的 B 细胞。这些选定的 B 细胞最终将分化为记忆 B 细胞和浆细胞,从而快速产生 SARs-CoV-2 特异性抗体。这些记忆 B 细胞和浆细胞有可能长寿并提供针对 SARS-CoV-2 病原体的持久保护,

细胞因子和趋化因子对抗体产生有何重要作用?

尽管形成细胞因子风暴的名声不好,但细胞因子在 B 细胞发育、存活、分化和增殖过程中具有重要的功能。B 细胞在对病毒入侵的免疫反应过程中产生中和抗体。在感染期间,B 细胞被趋化因子干扰素募集到病原体。到达病毒后,B细胞受体以高亲和力结合细胞膜上的抗原。进一步的 B 细胞刺激是由 T 辅助细胞释放的细胞因子引起的。B 细胞还产生对适应性免疫系统功能很重要的细胞因子。在 的背景下,细胞因子风暴可能是危险的,但细胞因子在保护性免疫发展过程中也发挥着重要作用。

细胞因子风暴与 的疾病严重程度有关吗?

是的。细胞因子通常具有响应病原体入侵的保护能力。然而,当细胞因子水平升高并在全身快速循环时,保护功能就会丧失。有适当的调节机制来解决细胞因子免疫反应。例如,细胞因子通常具有较短的半衰期,以抑制对局部感染部位的反应。在高于阈值的水平上,这些监管保护措施被克服,细胞因子变成病理性的,导致全身的附带组织损伤。

细胞因子充当炎症指标,也可能是 疾病进展的促成因素。细胞因子风暴最初表现为持续发烧和全身症状(头痛、疲劳等)。随着病情的发展,可能会出现全身炎症,表现为低血压、高烧、血管舒张,并最终导致器官衰竭。引起急需关注的重要研究领域是围绕驱动细胞因子风暴的机制和风险因素,以及如何在它们变得致命之前最好地进行治疗。

什么是细胞因子风暴?

循环细胞因子水平升高称为细胞因子风暴。细胞因子的作用是将中性粒细胞和单核细胞动员到炎症部位以响应病原体。细胞因子信号是一种快速反应,通常在病原体和受感染细胞被清除后消失。在 SARS-CoV-2 的背景下,细胞因子 IL-12IFN-aMHC 1 类表达和 NK 细胞活化共同需要以抵抗病毒复制和* SARS-CoV-2 感染细胞。然而,这些信号通路也可能导致在细胞因子风暴期间在错误的正反馈回路中快速产生促炎细胞因子和趋化因子。SARS-CoV-2 感染后被激活的促炎细胞因子的列表很广泛,包括 IFN-aIFN-gIL-1IL-6IL-17CXCL10TNF-a TGFb,和其他人一起。科学界已经确定了细胞因子风暴的关键参与者,但迫切需要更多关于它们如何发展以及如何阻止它们的机制的研究。

SARS-CoV-2 感染期间如何触发免疫系统?

SARS-CoV-2 的免疫反应是通过细胞因子介导的。SARS-CoV-2 感染后促炎细胞因子 IP-10MCP-1MIP-1A TNF-a 的释放增加,这与 的严重程度和死亡率相关。抗原呈递细胞 (APC),例如树突状细胞和巨噬细胞,在 SARS-CoV-2 进入宿主细胞后被触发。APC 通过模式识别受体识别病毒的结构成分。这种识别会诱导信号级联反应以激活免疫效应细胞,例如 B 细胞,并在初始防线中促进促炎蛋白 IFN-aNF-kBMAPK TNF-b 的产生。这很重要,因为 IFN 刺激基因的表达具有抑制病毒复制的功能。然而,这种最初的免疫反应是微妙的,因为促炎基因的过度表达会导致过度炎症,从而引发急性呼吸窘迫综合征,这在 中可能是致命的。尽管许多研究已经梳理出对感染的免疫反应机制,但并非每个人对病原体的反应都相同。这在 中尤为明显,其中存在多种免疫反应,从无法检测到可能致命的危险细胞因子风暴。

SARS-CoV-2进入靶细胞后会发生什么?

在通过 ACE2 受体进入靶细胞后,SARS-CoV-2 将病毒遗传物质释放到宿主细胞的细胞质中。病毒遗传物质以 mRNA 的形式存在,可以翻译成蛋白质。核衣壳或 N 蛋白与病毒 mRNA 结合,起到将遗传物质定位于内质网-高尔基体宿主机器的作用。非结构蛋白被翻译并形成复制酶-转录酶复合物,其功能是转录内源性病毒遗传物质。辅助蛋白和结构蛋白(例如 S 蛋白)的翻译和组装通过宿主内质网发生,然后是内质网 - 高尔基体中间区室 (ERGIC)N 蛋白加入新复制的 mRNA 并一起进入 ERGIC 与其他结构蛋白结合,最终形成新的 SARS-CoV-2 病毒。小囊泡通过胞吐作用将新形成的病毒从宿主细胞中排出。当病毒离开宿主细胞时,建议细胞表面的蛋白酶引发 S 蛋白,从而能够有效攻击其他细胞。SARS-CoV-2 病毒生命周期的复杂机制还有待进一步了解。

SARS-CoV-2 靶向哪些类型的细胞?

SARS-CoV-2 主要通过呼吸道和肺部的呼吸细胞进入人体。用于预测易受 SARS-CoV-2 感染的细胞类型的常用方法是分析进入相关基因的表达,例如 ACE2 TMPRSS2ACE2 SARS-CoV-2 结合以进入靶细胞的受体,TMPRSS2 S 蛋白启动所必需的。共表达 ACE2 TMPRSS2 的细胞包括肺泡 II 型上皮细胞、回肠肠细胞、鼻杯状细胞以及食道和结肠细胞。有趣的是,ACE2 在整个气道上皮中的表达水平较低,而在鼻分泌细胞中的表达水平最高。在气道细胞中,TMPRSS2 在一小部分 ACE2+ 细胞中表达,这表明 SARS-CoV-2 可能正在利用额外的宿主蛋白酶。例如,SARS-CoV-2 可能使用溶酶体蛋白酶组织蛋白酶 B,它在 70-90% ACE2+ 细胞中共表达。另一个需要更多研究的假设是 ACE2+ TMPRSS2+ 鼻杯状细胞可能是感染的初始位置,并具有作为病毒库的双重功能。需要更多的研究来确定被 SARS-CoV-2 直接感染的细胞类型。

SARS-CoV-2如何进入人体?

了解 SARS-CoV-2 如何感染细胞是了解其致病性的关键一步。SARS-CoV-2 在宿主蛋白酶激活剂的帮助下通过 ACE2 细胞表面受体进入细胞。来自SARS-CoV-2的刺突蛋白(S蛋白)通过受体结合域(RBD)与宿主细胞上的ACE2以高亲和力结合。宿主蛋白酶,如 TMPRSS2、弗林蛋白酶和溶酶体蛋白酶,需要通过蛋白水解激活病毒 S 蛋白。有人提出蛋白酶激活赋予 S 蛋白结构变化,增强 RBD ACE2 的结合并促进膜融合。宿主蛋白酶如何促进 SARS-CoV-2 结合和进入细胞的功能机制需要进一步研究。

SARS-CoV-2 是如何传播的?

根据世界卫生组织的说法,SARS-CoV-2 的传播是通过与受感染携带者的呼吸道飞沫和唾液分泌物密切接触而发生的。SARS-CoV-2 的传播甚至可以在产生气溶胶的医疗程序中通过空气传播。但是,尚不清楚 SARS-CoV-2 在非气溶胶生成过程中是否通过气溶胶途径传播。受污染的表面可能含有活的 SARS-CoV-2 病毒,尽管没有一致的证据表明 SARS-CoV-2 可以在接触受污染的表面后传播。已在粪便、尿液、血浆和血清中检测到 SARS-CoV-2 RNA,但尚不清楚病毒是否可以通过这些途径传播。SARS-CoV-2感染的传播和随后的传播还有更多的待了解。

是否有可用的超灵敏鲈鱼 ELISA?如果需要在粘液中检测较低的 VTG 值,是否有任何修改鲈鱼 ELISA 的建议?

TECO®鲈鱼卵黄蛋白原ELISA是鲈鱼/鲈形目市面上ELISA。目前,对超敏感协议的需求不足。使用当前协议的一种选择是将稀释系数从 1:1050μL 样品 + 450μL 提取缓冲液)降低到 1:650μL 样品 + 250μL 提取缓冲液)。在开发过程中,这已被证明可以适当提高检测的灵敏度。

当我收集样本时,我如何知道粘液样本没有被附近的鱼交叉污染?

如果担心附近鱼的交叉污染,建议擦拭鳃下的粘液。这可能是网捕的一个问题,因为高水平和低水平的卵黄蛋白鱼彼此靠近。

我怎么知道粘液样本没有与可能干扰检测并影响我的结果的其他环境物质交叉污染?

检测中使用的抗体非常特异,不能识别其他成分。此外,用于稀释用拭子收集的粘液的提取缓冲液(500μL)具有稀释效果,可以稀释环境污染物的罕见情况。在该检测的开发过程中,使用水族箱水作为阴性对照,与水族箱水相比,未检测到来自粘液样本的污染。

是否有必要单独针对蛋白质校正粘液(或血液,WBHVTG

虽然这不是必需的,但用于收集粘液的提取缓冲液和用于稀释血液和 WBH 的稀释缓冲液不含蛋白质,因此它们确实允许轻松平行测定蛋白质。

什么是校准器材料?

校准品材料是生物的而非重组的。它由经过柱子并通过亲和层析分离的血清制备。使用免疫组织化学染色、蛋白质印迹和 SDS PAGE 技术对其进行了广泛的验证和表征。

基质溶液的成分是什么?它在分析中的目的是什么?

确切的组成是专有信息。该溶液负责激活板的*反应性。

粘液提取缓冲液和样品稀释缓冲液的组成是什么?

确切的成分是专有信息,但两者都是针对分析优化的无蛋白质溶液。

试纸有什么涂层?

卵黄蛋白原的多克隆(亲和纯化)抗体。

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