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topogen全国代理
产品时间:2020-07-14
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动塑料DNA(kDNA)

SKU 尺寸       价钱       数量      

TG2013-1      25微克   15.00          

TG2013-2      50微克   2.00            

TG2013-3      250微克 3.00            

 

kDNA产品说明

kDNA是拓扑异构酶II分析的理想底物,因为它对II型反应机制具有特异性。研究人员甚至可以在存在大量过量的拓扑异构酶I的情况下检测II型酶。因此,kDNA可以很好地量化粗细胞提取物中的II型活性,而粗提物中经常富含拓扑异构酶I。kDNA底物在人类中的表现异常出色前2a和b以及原核生物酶,例如DNA促旋酶或拓扑异构酶IV。该底物与我们的Topo II分析试剂盒,Topo II药物试剂盒和旋回酶分析试剂盒包装在一起。

 

由于部分纯化的部分中存在topo I,因此基于超螺旋DNA松弛而采用粗提物进行topo II活性的测定可能会很复杂。由于污染核酸酶活性(由于Mg ++),会引起额外的复杂性,这会降解或切割超螺旋底物。通过使用从昆虫锥虫Crisidia fasciculata的运动塑料中制备的链状DNA底物,可以避免这些问题。动塑料DNA(kDNA)是互锁的DNA小环(大多数为2.5 kb)的聚集体,形成了非常大的高分子量网络。结果,这些网络无法进入琼脂糖凝胶。孵育后 与DNA参与双链断裂和团聚循环的topo II,有效释放了微环状DNA。由于它们的小尺寸,已分离的微型圆迅速移入凝胶。拓扑异构酶I不会发生此反应。反应产物可能如下变化:

 

质量控制测试:

 

对于连接的KDNA底物,至少90%的DNA将保留在1%琼脂糖凝胶的孔中。

 

用纯化的拓扑异构酶II测试每批Kinetoplast DNA的变性。

储存缓冲液:

kDNA以产品指定的浓度储存在10 mM Tris-Cl(pH 7.5)和1 mM EDTA中。

 

评论和引用:

 

菲利普斯·JW,格茨·马萨诸塞州,史密斯·SK,辛克·DL,波兰克·J,奥尼西·R,萨洛·S,威尔西·J,阿洛科·J,西格蒙德·J,多尔索·K,李·S,Skwish S,德拉克鲁兹M,马丁·J,维森特Genilloud O,Lu J,画家RE,Young K,Overbye K,Donald RGK,Singh SB:发现Kibdelomycin,这是一种通过金黄色葡萄球菌的化学基因分析方法开发的新型新型II型细菌异构酶抑制剂。  细胞化学与生物学 2011,18:955-965。doi:10.1016 / j.chembiol.2011.06.011。

 

运输和存放说明:

kDNA应储存在4°C下;但是,可以在-20°C下长期保存。DNA通常在环境温度下运输。

 

人Topoisomerase II分析试剂盒产品描述

 

该试剂盒旨在进行快速,特异性的II型真核DNA拓扑异构酶测定。该试剂盒可促进II型酶的纯化和鉴定,并包含II型拓扑异构酶常规检测所需的所有试剂。该测定基于动塑料 DNA(kDNA),并且由于它对II型活性(而非I型)具有特异性,因此可以用粗细胞提取物进行。反应产物使用由TopoGEN开发的新型凝胶系统解析,该系统可以极其快速且明确地检测拓扑异构酶II的活性。包括适当的缓冲液,DNA底物和DNA标记。Human Top2a包含在目录号中以-A表示的套件中。包含拓扑异构酶II脱链和线性DNA标记,可以清晰,轻松地识别用户定义的提取物或级分中的topo II活性。该测定试剂盒还可以与纯化的酶(由TopoGEN提供)结合使用,以检测topo II的抑制剂。kDNA分析将检测刺激topo II切割DNA的毒物以及仅抑制催化活性的物质。

 

人拓扑异构酶II检测试剂盒内容(用于100个检测试剂盒大小):

 

-100单位人类Top2a酶(目录号TG1001-1A提供)-动

塑料DNA(kDNA)20

ug-凝胶上样缓冲液中的

标记线性kDNA- 标记不连续的kDNA(经

Topo II处理)-10X Topoisomerase II测定缓冲液*

--5X终止缓冲液/凝胶加载染料-

详细说明手册

 

*为了提高稳定性,提供了10x Topo II Assay缓冲液作为两个成分:缓冲液A(无ATP)和缓冲液B(ATP)。每次通过组合缓冲液A和B制成新鲜的10x分析缓冲液。

 

使用人类拓扑异构酶II检测试剂盒滴定Topo II活性

 

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