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Proteintech一级代理
产品时间:2020-05-29
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2020年这个特殊的一年,病毒给大家的生产生活带来了的重大影响,

 

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MARCKSL1抗体1出版物

兔多克隆| 货号:11422-1-AP

物种特异性:人类,老鼠

在以下位置检测到正白平衡:人脑组织

在以下方面检测到阳性IHC:人肺癌组织,人肝癌组织,人胰腺癌组织

 

经过测试的应用

应用范围:WB,IHC,ELISA

应用程序未经测试?请参阅我们的保证

注意:建议使用pH 9.0的TE缓冲液进行抗原回收;(*)或者,可以用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复

推荐稀释度:

白平衡:1:500-1:1000

IHC:1:20-1:200

取决于样品,在“验证”选项卡中检查数据

资源:兔子

纯化方法:抗原亲和纯化

同型:IgG抗体

存储:具有0.1%叠氮化NA和50%甘油pH 7.3的PBS。储存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下储存。

免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967

全名:类马克1

计算分子量:195aa,20 kDa

观察分子量:48 kDa的

GenBank登录号:BC007904

基因编号(NCBI):65108

基因符号MARCKSL1

同义字F52,Mac MARCKS,MACMARCKS,MARCKS like 1,MARCKS like protein 1,MARCKS related protein,MARCKSL1,MLP,MLP1,MRP

 

MARCKS样蛋白1(MARCKSL1)在神经组织中广泛表达,也被称为MARCKS样蛋白(MLP)或MARCKS相关蛋白(MRP),属于MARCKS家族,是高度酸性的肉豆蔻酰化家族底物广泛分布在包括巨噬细胞在内的各种细胞类型中。由于SDS凝胶上的异常迁移或磷酸化,该蛋白质的计算分子量为20 kDa,表观分子量为42-48 kDa。MARCKSL1的遗传破坏导致神经管闭合缺陷,取决于肌动蛋白功能,细胞形状和细胞迁移的协调控制的事件。人们认为MARCKSL1调节肌动蛋白的细胞骨架,从而参与主要的细胞反应,如吞噬作用,分泌,运动,有丝分裂和膜运输。

 

免疫印迹和免疫沉淀法: 细胞裂解物的制备: 将 ripa 缓冲液加入细胞(35mm 的培养皿中加入100l,60mm 的培养皿中加入200l,100mm 的培养皿中加入500l) ,同时将培养皿置于冰上。 刮去电池,轻轻地摇动悬挂,或者在冰冷的房间里用摇杆或者轨道振动器摇动15分钟来溶解电池。 在冰水中用浴用声波仪进行声波处理,直到样品不再粘稠。 将细胞在12000克的温度下4 °c 离心5分钟,取出颗粒。 把上清液移到新鲜的管子里。 细胞裂解液的最终浓度为2-3克 / 升。 对 wb 来说,在裂解液中加入4个 sds 停止缓冲液,最终浓度为1个 sds。 免疫印迹法: 1。 煮沸10分钟后,20-50升样品将载入 sds 页面。 对于大多数蛋白质来说,建议以每道负荷量30-80克总溶解蛋白质,因为细胞中80% 的蛋白质种类浓度非常低。 图2。 将凝胶浸泡在免疫印迹转移缓冲液中。 聚偏氟乙烯膜被推荐用于大多数蛋白质。 将薄膜浸入甲醇中1-2分钟,将薄膜在转移缓冲液中浸泡10分钟,然后将其放置在一叠厚厚的浸过缓冲液的滤纸上。 然后用另一堆浸满缓冲液的过滤纸盖上。 把转移装置盖上。 凝胶应该在膜的负面。 图3。 以每平方厘米1毫安的电流跑90分钟。 图4。 在室温下或在4 °c 的温度下用缓冲液将细胞膜孵育1小时。 用清洗缓冲液清洗隔膜35分钟。 5. 用阻断缓冲液稀释一级抗体。 在室温下将细胞膜培养1.5小时。 用清洗缓冲液清洗隔膜35分钟。 图6。 用阻断缓冲液稀释二级抗体。 在室温下将细胞膜培养1小时。 用清洗缓冲液清洗隔膜35分钟。 图7。 用清洗缓冲液清洗隔膜310分钟。 图8。 用 ecl 显色。

 

免疫沉淀法: 1。 将200-350升的细胞裂解液(含有1-3毫克总蛋白质)转移到微滤管中。 加入150-300升培养液和1-4克一级抗体到细胞(或预先清除的)裂解液中。 最JIA抗体浓度应通过滴定法确定,用对照 igg (对应于一抗源)建立阴性对照实验。 在4 °c 的环境中轻轻摇晃孵化箱2-4小时或过夜。3。 加入50升蛋白 a 或克琼脂糖浆以获得免疫复合物。在4 °c 下轻轻摇动混合物1-4小时。 取下端盖,必要时将上清液从旋转塔底部释放出来,再悬浮混合物以提高流速。 用1汤匙含1个蛋白酶抑制剂的量清洗珠子5次。 最后一次清洗后,用500克离心机将旋转塔在4c 下离心30秒,用收集管收集过滤液,然后丢弃。 将自旋柱置于新鲜的微滤管中,并将洗脱液集中起来。 用40l 洗脱缓冲液洗脱,离心8000ー10000g,在4c 条件下洗脱1min,再用新的40l 洗脱缓冲液洗脱一次。 在洗脱液中加入10l 碱中和缓冲液和30l4样品缓冲液,95-100c 加热5分钟。 存储在零下20摄氏度或加载20-40升在 sds-页面,并检测它由宽带。、

 

组织培养细胞免疫荧光方案: 1。 将细胞培养在小的圆形盖玻璃上。 4% pfa 或有机溶剂固定细胞20分钟在4 c (如果你使用有机溶剂固定,只需跳过步骤3,直接进入步骤4)。 将玻璃倒入0.2% ttiton x-100-pbs 中5分钟。4。 用 bsa-pbs 在室温下封闭细胞1h 或在4 °c 下封闭过夜。 5. 在盖玻片上加入50升特异性初级抗体,在室温下的潮湿容器中培养1小时。 在每个盖玻片上加入50升荧光标记的二级抗体,室温下在黑暗中的潮湿容器中孵育1小时。 用15% 的甘油或者小量的水溶液装在载玻片上。8。 在边缘用指甲油封住YIN唇。石蜡包埋组织切片的免疫组织化学:。 二甲苯分别用两种方法分离载玻片40分钟和20分钟。 转移载玻片到100% 酒精,95% 酒精,80% 酒精,60% 酒精和 ddh2o5分钟。 将载玻片放入装有抗原恢复缓冲液的容器中,中间放置微波几分钟(700瓦烤箱) ,让恢复液在室温下冷却。 用 tbs 清洗25分钟。 在3% h2o2溶液中培养10分钟,阻断内源性过氧化物酶活性。 用 tbs 清洗25分钟. 7。 将5-10% 的山羊血清置于 tbs 液中室温封闭30分钟。 排水滑梯几秒钟(不要冲洗) ,擦拭圆形部分。9。 应用 tbs 的一级抗体。 在室温下孵化1小时或在4 °c 下孵化一夜。10。 用汤匙冲洗25分钟。 在室温下应用预想的二级抗体30分钟。 用 tbs 冲洗25分钟13。 在室温下用色原显影,在显微镜下观察。14。 用流动的自来水冲洗5分钟。 在市长的苏木精浴中反染30-60秒。 在水中洗7-8次,然后自来水3分钟。17。 分别用60% 、80% 、95% 和100% 的酒精脱水5分钟。 转移到二甲苯5分钟。 空气30分钟。19。安装

 

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