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小鼠血小板清除抗体 试剂
产品时间：2025-10-30
小鼠血小板清除抗体 试剂克隆：多克隆非免疫大鼠免疫球蛋白同形像统计图：大鼠免疫球蛋白形式：purif应用程序：负控制#R300大小：0.5毫克
小鼠血小板清除抗体 试剂
克隆：多克隆非免疫大鼠免疫球蛋白
同形像统计图：大鼠免疫球蛋白
形式：purif
应用程序：负控制#R300
大小：0.5毫克
技术协议
小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞分析
-制备稀释或洗净的全血
-制备洗涤小鼠血小板
-血小板表面糖蛋白表达单色分析
-血小板活化双色分析
免疫组织化学（含丙酮固定冰冻切片）
免疫沉淀反应
免疫印迹（Western Blot Analysis）
小鼠血小板表面糖蛋白的流式细胞分析
缓冲液和试剂
Tris缓冲盐水/肝素（TBS/Hep）： 20 mM Tris/HCl；137 mM NaCl；pH值7.3;含肝素20 U/ml。
磷酸盐缓冲盐水（PBS）： 137 mM NaCl；2.7 mM KCl；1.5 mM KH2PO4；8mm Na2HPO4；pH值7.14。
Tyrode’s Buffer（改性）：134 mM NaCl；0.34 mM Na2HPO4；2.9 mM KCl；12mm NaHCO3；20 mM Hepes；pH值7.0;5 mM葡萄糖；0.35% （w/v）牛血清白蛋白
Apyrase: 10u /ml H2Obidest原液（-20℃保存）
前列腺素（前列腺素2，PGI2）： 1mm储存在H2Obidest中（保存在-20°C）
CaCl2: 1 M的H2Obidest库存
最重要的
配制稀释或洗净的全血
用肝素化玻璃毛细血管（如环帽）从眶后神经丛取50µl血液，放入含有200µl TBS/肝素（20 U/ml）的1.5 ml管中。
用1ml Tyrode缓冲液稀释，用于流式细胞术分析。
制备洗血，将稀释后的血液900 x g离心5分钟，去除上清，将微球重悬于1.25 ml Tyrode缓冲液中。
实验开始前，直接加入1mm的CaCl2。
注意：对于凝血酶诱导的血小板活化，必须去除血浆以防止抗凝血酶活性
最重要的
小鼠洗净血小板的制备
洗涤血小板的制备是一种更耗时的方法，需要更多的血液，但产生的血小板制备可以使用几个小时。
从眶后神经丛用1.5 cm的玻璃毛细血管采集0.5 - 1ml血液，放入1.5 ml的管中，管中含有200µl TBS/肝素（20 U/ml）。
样品在500 x g下离心5分钟，将富血小板血浆（PRP）转移到新管中。为了最好地恢复血小板，服用全白期，包括一些红细胞。
将血小板悬液在300 × g下离心8分钟，将不含红细胞的PRP移入新管。
加入0.5µM prostacyclinin (PGI2)， 1300 × g离心5分钟。
将血小板颗粒重悬于1ml Tyrode’s缓冲液中，加入0.02 U/ml apyrase和0.5µM prostacycyclin， 37℃孵育5min， 1300 × g离心5min。
重复步骤5，将血小板小球重悬于0.5 ml Tyrode缓冲液中，加入0.02 U/ml apyrase， 37℃孵育30 min。
最重要的
血小板表面糖蛋白的单色分析
将5µl特异性或阴性对照抗体与25µl稀释的全血或洗过的血混合在测定管中，旋涡混合1-2秒。
室温孵育15分钟。
加入400µl PBS停止反应，30分钟内分析。
北京华新康信生物科技有限公司代理Emfret品牌。北京华新康信生物科技有限公司是Emfret 品牌代理商。
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Emfret华新康信
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