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Peps6捕获BAC试剂盒
Peps6捕获BAC试剂盒
描述:
Peps6-CaptoBAC试剂盒在大多数样本中进行细菌捕获。它包括涂有Peps6的磁珠和一种特别开发的缓冲液,以确保优良的细菌捕获。 根据试剂盒说明,将样本稀释在缓冲液中,然后加入磁珠。经过短暂的振荡孵育后,去除上清液,同时磁铁(不提供)将磁珠固定在下方。然后细菌在磁珠上浓缩,并且没有潜在的抑制剂。它们可以用常规检测方法进行分析。 该产品的保质期为2年,保存在2-8°C。该产品有25或50测试格式可供选择。
参考编号:MP10031-50T
数量:50次测试
成分:
1 mL的Peps6磁珠(编号:MP20006-1ML)
50毫升缓冲液TTGB 10X(编号:TP10004-50ML)
Peps6-捕获BAC试剂盒
描述:
Peps6-CaptoBAC试剂盒在大多数样本中进行细菌捕获。它包括涂有Peps6的磁珠和一种特别开发的缓冲液,以确保优良的细菌捕获。 根据试剂盒说明,将样本稀释在缓冲液中,然后加入磁珠。经过短暂的振荡孵育后,去除上清液,同时磁铁(不提供)将磁珠固定在下方。然后细菌在磁珠上浓缩,并且没有潜在的抑制剂。它们可以用常规检测方法进行分析。 该产品的保质期为2年,保存温度为2-8°C。该产品有25或50测试格式可供选择。
参考编号:MP10031-25T
数量:25次检测
成分:
0.5 mL的Peps6磁珠(参考编号:MP20006-0.5ML)
25 毫升缓冲液 TTGB 10X(参考编号:TP10004-25ML)
1. 简介
合成分子 Peps6 源自载脂蛋白 H(ApoH),保留了其结合微生物的能力,包括病毒(1-2)、真菌(3)和细菌(4-6)。ApoH 蛋白也称为载脂蛋白 H 或 β2 - 糖蛋白 1,其多特异性允许对多种微生物进行多重捕获。这种亲和捕获方法简单、温和且快速,可使微生物保持活力和感染性。捕获的微生物被浓缩并与潜在抑制剂分离,从而更易通过常规特异性技术(如 PCR、ELISA 等)进行鉴定 / 检测,显著提升灵敏度(7-10)。
这些特性使 Peps6-CaptoBAC 试剂盒成为一种创新的样品预处理工具,用于细菌分离,以便进行高灵敏度的鉴定 / 检测。
2. 123原理
在 Peps6-CaptoBAC 试剂盒中,Peps6 与磁珠结合。试剂盒提供一种特殊结合缓冲液,可增强 Peps6 对细菌的亲和力。将 Peps6 磁珠加入任何复杂生物样本中(用提供的缓冲液稀释),样本中的初始杂质和潜在抑制剂可被去除,而通过 Peps6 与磁珠结合的细菌则通过磁铁保留在试管中。随后,细菌可通过分子技术(PCR)、免疫检测(ELISA、WB)或在合适培养基中培养等方法进行鉴定 / 检测。
3. 45试剂
REF MP20006 – Peps6 磁珠
合成 Peps6 包被的磁珠悬浮液浓度为1013个珠子 / 毫升,珠子直径约 200 nm,缓冲液含 < 0.02% 叠化钠。
REF TP1006704 – TTGB 10X 缓冲液
TTGB 10X 缓冲液为浅黄色水性结合缓冲液,经 0.2 µm 过滤,浓缩 10 倍,使用前需按说明稀释。
注意:试剂盒中89的所有试剂均可单独购买。
4. 10存储
所有试剂可在室温下运输,功能不受影响;收到后需存储于 2-8°C。
所有试剂在 2-8°11C 下可稳定保存至有效期。
Peps6 磁珠瓶需12直立存放,确保磁珠始终浸没在存储液中。
使用后,所有试剂需13迅速放回 2-8°C 存储。
5. 14所需材料(未提供)
无菌蒸馏水。
合适的微量移液器和无菌滤芯吸头。
合适的反应管(玻璃或聚丙烯塑料材质,避免聚苯乙烯)。
孵育过程中用于样品15搅拌的设备。
温控培养箱。
层流罩或目标微生物所需的特定微生物环境。
与试管兼容的侧向磁16吸装置(注意:不同市售磁铁的吸引力和速度可能不同)。
目标微生物检测所需17的材料和试剂。
6. 18安全注意事项
为确保稳定性,所有试剂需小心处理,避免污染。
是否需要无菌操作区19域取决于捕获微生物的用途(如需培养则必须无菌)。
Peps6 磁珠存储20缓冲液含 < 0.02% 叠化钠,痕量叠化钠不影响捕获或微生物活力,使用前无需清洗磁珠。叠化钠可能与铜或铅管道反应生成爆炸性叠氮化物,通过管道处理时需用大量水冲洗,防止叠氮化物堆积。
试剂和样本需按照良21好实验室规范处理,未使用的试剂、样本和废弃物需按当地法规处置。
请勿使用过期试剂。22
7. 23重要提示
本方案为最多 5 mL 样本中细菌结合的通用指南,根据细菌菌株、样本性质和体积,可能需要进一步优化以实现优良结合能力。
ApoH 捕获机制不同于24常规抗原 - 抗体相互作用,如需确保实验成功,请联系我们的技术支持。
捕获细菌前,Peps62526磁珠不得涡旋、冷冻、干燥、高温(>60°C)或端 pH(>9 或 < 5)处理。若需保留微生物活力,捕获后也需遵循同样注意事项。
若怀疑微生物负载较27高,可增加磁珠体积。磁珠可结合大量微生物:1 µL 磁珠可从纯培养物中结合1×107个大肠杆菌。
8. 28样本采集与处理
现有数据表明,Peps6 磁珠可捕获各种固体(悬浮后)或液体样本中的细菌。
固体样本(如肉类、29组织)需在 1X 捕获缓冲液中研磨,过滤后再加入磁珠,否则磁珠可能被样本颗粒卡住,无法磁化。
优先使用新鲜样本,30避免混合样本。混合血液、血清或血浆可能形成凝块,捕获并聚集磁珠,使其无法结合微生物。
若进行细菌添加实验31,需使用临床菌株而非 “标准菌株"(如 ATCC 菌株),许多标准菌株对 ApoH 蛋白或 Peps6 分子的亲和力会下降。
使用全血时,需选择32EDTA 抗凝剂。
所有稀释或处理后的33样本需迅速与 Peps6 磁珠接触。
样本体积可按比例调34整,若怀疑微生物滴度较低,可扩大样本体积。超过 5 mL 的样本,需联系技术支持。
受损微生物可能失去对 A35poH 蛋白或 Peps6 分子的亲和力,因此:
优先使用新鲜样本材料。
检查冷冻样本中细菌36的活力,避免样本反复冻融。
使用劣质样本会导致37灵敏度下降。
9. 38使用说明
样本在捕获缓冲液中的稀释
将样本稀释于捕获缓冲液中并涡旋,稀释后缓冲液终浓度必须为 1X:
小体积样本(1-199 µL):将 TTGB 10X 缓冲液用无菌蒸馏水稀释至 1X,加入足够的 1X TTGB 缓冲液,使样本总体积达到 1 mL。
大体积样本(039.2-5.0 mL):将 TTGB 10X 缓冲液用无菌蒸馏水稀释至 2X,按 1:1 体积比加入样本中。
捕获步骤 40
使用前,通过轻柔吹打或手动倒置底重悬 Peps6 磁珠(切勿涡旋)。
每个样本加入 20 41µL Peps6 磁珠。
轻轻混匀(切勿涡旋42)。
在 35-37°C 下43适当搅拌孵育 30 分钟:试管需直立并剧烈搅拌,使磁珠保持悬浮状态(如设置 Thermomixer 为 1000 rpm)。
将反应管置于磁铁上44,直至所有磁珠侧向沉淀且上清液澄清。
弃去上清液,避免扰45动磁珠沉淀,细菌即浓缩于沉淀中。
洗涤(可选)46
纯培养物、血浆或血清无需洗涤,全血等复杂样本可能需要洗涤:
向磁铁上的磁珠沉淀中轻轻加入 1 mL PBS(不含Ca2+/Mg2+),勿重悬磁珠。
弃去上清液,避免扰47动沉淀。
如需可重复洗涤一次48。
10.49 细菌检测
结合的细菌可直接在 Peps6 磁珠上通过标准方案检测(必要时可调整)。注意:小体积样本需在加入重悬液前短暂离心磁珠沉淀。
培养:将磁50珠重悬于合适培养基中,直接涂布于培养皿,在细菌适宜温度下孵育。
PCR:将51磁珠重悬于裂解缓冲液中,剧烈涡旋 15 秒以破坏沉淀。裂解后,通过磁铁或离心(10,000 g,1 分钟)去除磁珠,转移上清液至新管,按常规流程提取 DNA 并进行 PCR。
显微镜观察52:将磁珠重悬于 PBS 或特定培养基中,磁珠无自发荧光,可用于荧光检测。
其他方法:53将磁珠重悬于适当溶液中,如需其他特定应用,请联系技术支持。
11.54 故障排除
以下为常见问题指南,如需进一步帮助或定制方案,请联系技术支持。
磁珠和缓冲液处理55
需在无菌环境中打开 Peps6 磁珠瓶,污染会降低稳定性和效率。
必须将磁珠加入样本56中,而非反向操作。
使用无菌蒸馏水稀释57缓冲液,确保混合后 TTGB 缓冲液为 1X 浓度。
检查 TTGB 缓冲液58是否污染。
根据微生物或样本类59型,可优化捕获缓冲液的选择和用量。
大体积样本 60
5-100 mL 大体积样本需额外购买磁珠和缓冲液。
样本稀释:直接加入612X 或 10X 浓缩的 TTGB 缓冲液,使终浓度为 1X。
每个样本加入 20 62µL 磁珠,超过 10 mL 的样本可能需要增加磁珠体积。
超过 20 mL 的样63本可采用轨道搅拌(设置为 3 rpm)代替直立搅拌。
大体积样本需预温至64室温或孵育温度后再加入磁珠。
孵育
-65 严格遵循温度和时间以确保优良结果。
选择足够大的试管以66保证充分搅拌(如 1 mL 反应用 1.5 mL 试管)。
试管需直立并剧烈搅67拌(如 1000 rpm),使用玻璃或聚丙烯试管,避免聚苯乙烯。
磁化
-6869 若上清液中残留磁珠或沉淀被吸头扰动,需延长磁化时间(细胞培养样本通常 2 分钟,全血样本可达 15 分钟)。
使用高能钕磁铁(870-12 kg 吸引力)确保磁珠全磁化,磁力过低会导致磁珠和微生物损失,过强可能使磁珠嵌入塑料管。
吸弃上清液前需去除71气泡。
磁化时间不得超过 3720 分钟,以免破坏微生物完整性。
洗涤
-73 细胞上清液、血浆或血清无需洗涤(除非检测系统高度敏感),全血等复杂样本可能需要洗涤 2 次,洗涤时需在磁铁上操作,切勿涡旋。
PBS 可替换为其他74洗涤缓冲液,需联系技术支持确认兼容性。
检测
-75 部分细菌捕获后无法培养(处于活但不可培养状态),需通过显微镜或 PCR 验证捕获效果。
裂解步骤至关重要,76裂解缓冲液效率取决于化学组成,建议添加裂解对照,可剧烈涡旋磁珠以确保裂解充分。
如需光密度测量,需77用磁铁去除磁珠,仅检测上清液(磁珠呈深棕色,会严重干扰光学测量)。
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