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Vectorlabs北京试剂
产品时间：2022-11-25
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生物结合试剂 SoluLINK 生物结合技术已经被设计成允许所有类别的生物分子的快速和可量化的结合。该技术是基于 HyNic 与4FB 反应生成稳定的双芳腙键。与其他的共轭化学不同，这些连接体是发色的，这意味着它们吸收光线，因此可以很容易地通过简单的光谱仪读数进行量化。双芳腙生色团对于测量每个生物分子上的接头数和两个生物分子之间的结合程度是至关重要的。可量化的接头允许伦比的重复性从批量到批量的生物共轭制备。去除未包含的标签的纯化是至关重要的，因为它导致减少非特异性结合，更高的灵敏度和更高的信噪比在您的测定。尽管它们看起来很简单，但是由于低效的共轭化学和缺乏纯化步骤，相互竞争的“混合和使用"共轭产物并不能很好地工作。这使得反应混合物中既有未结合的生物分子(例如抗体) ，也有过量的标记(例如氟、寡核苷酸和酶)。ChromaLINK 物素和辛是唯的试剂，他们的类型，可以直接定量连接到生物分子。这些试剂含有与 SoluLINK 生物结合技术相同的双芳基腙键。物素化的生物分子被有效地固定在链霉亲和素包被的表面，如磁珠和琼脂糖。NanoLINK 和 MagnaLINK 链霉亲和素磁珠具有比其他市售产品高15倍的物素结合能力。链霉亲和素琼脂糖超高性能 TM 还具有市场上任何琼脂糖珠最高的物素结合能力。SoluLINK 结合试剂盒包含生产和纯化高质量结合所需的一切。共轭连接器和附件也可作为灵活的独立产品扩大工作。这些接头是理想的蛋白质交联，蛋白质标记，化学交联，蛋白质交联和抗体缀合。所有 SoluLINK 产品均按照 TriLink ISO9001:2015质量体系生产，以确保持续供应高质量产品。
抗体-寡核苷酸 All-in-OneTM 结合试剂盒 A-9202
抗体-寡核苷酸全合一结合试剂盒使用的 SoluLINK 生物结合技术将抗体与寡核苷酸连接起来。琥珀酰亚胺基 -4-甲酰基苯甲酰胺(S-4FB)修饰的寡核苷酸和琥珀酰亚胺基 -6-肼基酰胺(S-HyNic)修饰的抗体形成抗体-寡核苷酸偶联物。该试剂盒专门设计用于将100μg 抗体偶联到20-80核苷酸范围内的任何氨基修饰的寡核苷酸。主要特点: 任何哺乳动物单克隆或多克隆 IgG 同种型抗体都可以与寡核苷酸偶联，并在总动手时间约4小时内纯化。SoluLINK 生物共轭技术在354nm 处形成稳定的、紫外可追踪的双芳基腙键，其摩尔消光系数为29,000L mol-1cm-1。由于发色共轭键的形成，共轭反应可以用分光光度法定量。抗体标记/修饰剂类型寡核苷酸反应性胺推荐储存2 °-8 ° C-不要冻结应用抗体标记,s-HyNic (100μg)• Oligo 再悬浮液(1mL)•1X 修饰缓冲液(1.5 mL)•珠洗液缓冲液 A (5mL)•珠洗液缓冲液 A (250μL)•红帽旋转柱(2)•黄帽旋转柱 A无水 DMF (1.5毫升)2-肼基吡啶(2-HP)试剂(500μL)亲和磁珠(100μL)2毫升收集管(14) S-4FB (1毫克)棕色帽旋转柱 C (2)
抗体寡核苷酸一体化结合 KitCat。没有。A-9202-001储存室2 °-8 ° C ー不要冻结。抗体-寡核苷酸全合一结合试剂盒需要100μg 抗体，浓度为1mg/ml。抗体缓冲液不应含有载体蛋白，如 BSA 或明胶，不应含有高浓度(> 25%)的甘油。该试剂盒设计用于在20-60核苷酸范围内的25 OD260单位的氨基修饰寡核苷酸的最佳执行。短于20个核苷酸的寡核苷酸不能成功地与该试剂盒结合; 长于60个核苷酸的寡核苷酸可以使用，尽管以牺牲结合产率为代价。如果需要，可以使用至少15 OD260单位的氨基修饰寡核苷酸。抗体-寡核苷酸全合一结合试剂盒包含所有必要的试剂和组分来产生一个抗体-寡核苷酸结合物。基于的 SoluLINK 生物结合技术，它允许任何纯化的 IgG 同种型哺乳动物抗体在三个阶段的过程中进行结合和纯化，这个过程大约需要11小时，只需要2小时的动手时间。首先用 S-4FB 修饰用户提供的氨基寡核苷酸，然后用 S-HyNic 修饰用户提供的抗体。接下来，两个修饰的生物分子在反应催化剂存在下混合形成共轭物，随后使用磁性亲和固相进行纯化。这个过程的结果是20-60μg 的高纯度抗体-寡核苷酸偶联物是准备使用(图1)。产量在很大程度上取决于寡核苷酸的长度，较短的寡核苷酸通常具有较高的产量。最终的共轭物浓度通常在0.1 -0.3毫克/毫升之间。
抗体-寡核苷酸全合一结合试剂盒遵循三阶段方案，每个阶段需要几个小时才能完成。如果需要，该方案可以分为两天，第1天进行阶段1(用 S-4FB 修饰氨基寡核苷酸，持续4小时) ，第2和第3阶段(用 S-HyNic 修饰抗体，然后偶联物形成和纯化，持续6.5小时)在第2天。不建议在第二阶段之后停止该程序。从4FB 标记的寡核苷酸开始大大减少了完成过程的总时间。用 S-4FB1修饰氨基寡核苷酸如果从4FB 修饰的寡核苷酸开始，直接进入阶段2。输入氨基寡核苷酸细节到抗体-寡核苷酸结合计算器直接从寡核苷酸供应商的分析证书进入抗体-寡核苷酸结合计算器.a)寡核苷酸名称) OD260单位供应商提供的 A 部分)寡核苷酸摩尔消光系数(公升 mol-1cm-1) d)寡核苷酸分子量(道尔顿) e)每 OD260纳摩尔产品数据表中列出
重悬浮氨基寡聚体1。确保至少15 OD260单位的寡核苷酸可用于修改。2。将装有冻干寡核苷酸的小瓶以15,000 x g 的速度离心15秒，使冻干物质在试管底部沉淀。3。如果试管中含有15-25 OD260单位的寡核苷酸，向试管中加入50μl 的寡核苷酸再悬浮液。如果试管中含有超过25OD260单位的寡核苷酸，加入足够体积的寡核苷酸重悬浮溶液以产生0.5 OD260/μl 的溶液(例如，如果有31OD260单位的寡核苷酸，加入62μl 的寡核苷酸重悬浮溶液)。让小球重新水合1分钟，然后以中速轻轻旋转溶液10秒，以帮助溶解。重复这个过程，直到没有未溶解的冻干残留物。测量低聚物浓度低聚物浓度可以使用微容量紫外-可见分光光谱仪(例如 NanoDropTM)或传统的紫外-可见分光光度计来测量。按照下面的说明可用的仪器类型。用纳米滴定法测定低聚物浓度: 1。在微量离心管中，将2.0 μl 低聚物溶液转移到398μl 超纯水中，制备1:200稀释液。搅拌均匀。2。选择纳米滴上的“核酸"模块，用超纯水初始化仪器。3。清洗样品台座，用2μl 超纯水冲洗。测量1:200寡核苷酸溶液的260nm 吸光度，如在10mm 光程窗口中显示的那样。5。将 A260值除以5，计算出库存寡聚溶液的 OD260/μl 浓度。
用常规UV-Vis测定寡聚物浓度
分光光度计：
1.在微量离心管中，通过转移制备1:500稀释液 将2.0μl低聚溶液加入998μl超纯水中。通过以下方式充分混合涡流。2.使用1cm路径长度的石英比色皿，空白分光光度计 在260nm下使用超纯水。3.测量1:500寡聚物溶液的260nm吸光度。4.将该数字除以2，计算储备低聚溶液。OD260/μl氨基寡聚物浓度通过方法，将该值乘以50μl，以确定低聚体可用于修饰。如果可用的OD260单元少于15个，在继续之前获得额外的寡聚物。D、 缓冲液交换氨基寡聚物1.拧松瓶盖半圈，准备一个红色瓶盖旋转柱，拧下底部封口，并将其放入2毫升的空容器中收集管。2.使用实验室标记，在柱的外侧放置一条垂直线。确保该线朝外（远离转子中心）在该步骤和所有后续步骤中。3.以1500 x g离心柱1分钟以除去储存物缓冲器重要提示：确保离心机设置为“g"或RCF，而不是RPM在所有离心步骤中。4.从收集管上取下柱（丢弃收集含有过量缓冲液的管），并将柱置于新的2ml中收集管。5.缓慢小心地将50μl寡聚物溶液移入树脂床的中心。小心不要让低聚溶液接触管壁；它必须向下通过树脂本身。6.更换盖子并松开半圈。7.以1500 x g离心柱2分钟，以回收脱盐的寡聚物进入收集管。8.将此溶液转移到新的微量离心管中并测量μL微量移液管。9.将回收的脱盐低聚体的体积（μl）输入抗体–寡核苷酸结合计算器。10.轻轻涡旋低聚溶液，使其充分混合。11.重复上述C节所述的浓度测量。12.将计算的ODc/μl低聚原液浓度输入抗体-寡核苷酸结合计算器。注：过量的不合格寡聚物可无限期储存在以下-20°C。E、 溶解S-4FB1.以15000 x g的速度短暂离心S-4FB试剂，以确保所有材料在管子的底部。2.向S-4FB中加入40μl无水DMF并涡旋20秒重新悬浮。6737 Mowry Avenue我们一起突破™用户指南接第2页。第3页3.继续周期性涡旋，直到颗粒全溶解。可能需要上下吸移样品几次。4.将全溶解的试剂快速旋转至试管底部。F、 用S-4FB修饰氨基寡聚体使用A节和B节中输入的信息寡核苷酸结合计算器将确定体积将无水DMF和S-4FB在无水DMF中加入脱盐的氨基低聚溶液。这些卷可在C节中找到抗体-寡核苷酸结合计算器。1.向低聚溶液中加入定体积（μl）无水DMF并短暂涡旋混合。2.将溶解在无水DMF中的定体积的S-4FB添加至寡聚物和漩涡混合。不要离心反应混合物加入S-4FB试剂后。3.在室温下孵育2小时，使S-4FB反应与氨基寡聚物。4.以15000 x g离心管2分钟，以沉淀任何不溶物反应副产物。在以下G部分中，仅使用澄清上清液（其含有4FB寡聚物）。G、 去除多余的S-4FB1.在4FB寡聚修饰反应结束前5分钟，通过将每个瓶盖拧松一半，准备两个棕色瓶盖旋转柱旋转，拧下每个底部封口，并将每个柱放置在空的2ml收集管。2.使用实验室标记，在每列的外侧放置一条垂直线。确保该线朝外（远离转子中心）在该步骤和所有后续步骤中。3.以1500 x g离心柱1分钟以去除储存缓冲器重要提示：确保离心机设置为“g"或RCF，而不是RPM在所有离心步骤中。4.从收集管上取下柱（丢弃收集含有过量缓冲液的试管），并将柱放入新的2ml中收集管。5.缓慢小心地用移液管将整个低聚修饰反应移入只有一列的中心。小心不要让寡聚溶液接触柱壁；它必须向下通过树脂本身。6.更换盖子并松开半圈。保持另一列打开在下一步中，将工作台顶部（不要将其用作平衡管）。
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