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Plantcellwalls实验试剂
产品时间:2022-10-19
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在我们实验室分发细胞壁单克隆抗体超过20年之后,PlantProbes 的活动在20216月底停止了。我们感谢世界各地的研究人员对我们的细胞壁抗体所表现出的兴趣,我们很高兴它们继续有用。抗体特异性和出版物链接抗体将继续从其他来源获得,包括 Kerafast Megazyme Ximbio。褐藻多糖和藻酸盐的 BAM 抗体可以在罗斯科夫的 SeaProbes 上买到。目前正在探索选择这些试剂的其他途径。JIM MAC 抗体的选择(AGPs/伸展蛋白)也可以从 CCRC/佐治亚大学的 Carbosource 获得。如果你对 CBMs 感兴趣,请注意里斯本的 NZYTech 有大量具有广泛特异性的 CBMs。我们的抗体探针的概述列表和简短指南我们的细胞壁抗体是高度敏感的,高度特异性和通用的分子工具,可用于显微镜分析和定量评估所有植物材料中的细胞壁聚合物,从水果和蔬菜到纤维和所有形式的植物生物量。我们很乐意讨论探针的任何潜在用途或应用。任何关于我们抗体的询问,请联系 Paul Knox

 

细胞壁聚合物探针的产生我们的研究目标之一是产生用于原位分析细胞壁聚糖的特定探针。针对寡糖表位的单克隆抗体等探针是分析植物细胞壁多糖在生命周期中的时空分布及其修饰的重要工具。此外,它们是确定聚合物排列和单个细胞壁结构的必要工具。我们的探针一般是大鼠杂交瘤单克隆抗体。我们还探索了来自细胞壁水解酶的重组组氨基酸标记的碳水化合物结合模块(CBMs)作为细胞壁组分的探针以类似于抗体的方式起作用的能力。聚糖单克隆抗体的产生并不简单。其局限性包括聚糖的低免疫原性,这往往需要制备新糖蛋白免疫原。这涉及到一个确定的寡糖偶联到一个免疫原性蛋白,如 BSA KLH。这一策略导致了1,4-半乳聚糖,1,4-木聚糖,1,5-阿拉伯聚糖,1,4-甘露聚糖和木葡聚糖单克隆抗体的产生。一个复合因素是适当定义的寡糖的有限可用性,这些寡糖既是与蛋白质和免疫原制备的偶联所必需的,也是衍生抗体的角色塑造所必需的。我们参与生成的单克隆抗体的清单以及目前如何获得样品的细节可以在这里找到: 抗体。

 

我们的大鼠单克隆抗体以杂交瘤细胞培养上清液的形式获得,这些上清液含有(0.05% w/v)作为防腐剂。它们可以储存在4摄氏度,在那里它们将保持活跃多年。它们可以被冷冻,但应避免重复的冷冻/解冻周期。所述抗体在含有阻断蛋白如牛奶蛋白或 BSA PBS (磷酸盐缓冲盐水)中用作10倍至100倍的稀释液。所有二级检测抗体也应在此缓冲液中适当稀释。抗体孵育的每个阶段应进行至少1小时。培养大多在室温下进行,而 O/N 培养可在4 °C 下进行。LM JIM 系列单克隆抗体是 RAT 单克隆抗体,需要抗大鼠 IgG (全分子)二级试剂。使用我们的抗体/CBMs 在生物原型 Cornuault VKnox JP (2014)三明治 ELISA 分析植物细胞壁聚糖连接的新方案。使用大鼠单克隆抗体在..

 

免疫标记技术免疫荧光抗体免疫标记方法概述通过在磷酸盐缓冲盐水(MP/PBS)中与3% (w/v)牛奶蛋白孵育至少30分钟,阻断制备的细胞或粘附在玻片上的植物材料的非特异性结合位点。用稀释于 MP/PBS 中的大鼠单克隆抗体在室温下孵育至少1小时或在摄氏4度下孵育过夜。将杂交瘤上清液稀释五倍是获得第一抗体的良好起点。用三次 PBS 洗涤,每次洗涤至少5分钟。与在 MP/PBS 100倍稀释的第二抗体一起在 RT 培养1小时。我们使用与 FITC (Sigma)清洗连接的抗大鼠 IgG (全分子)与三种 PBS 变化,每种变化至少5分钟。使用防褪色试剂装载载玻片并检查。我们使用花旗荧光甘油为基础的抗褪色切片。免疫金标记抗体免疫标记方法概述通过将 EM 网格切片侧面漂浮在3% (w/v)牛血清白蛋白在磷酸盐缓冲盐水(BSA/PBS)中的液滴(至少20ml)上防止非特异性结合在 Parafilm 30分钟。转移网格到 BSA/PBS 稀释液滴中的一抗。单克隆抗体应在5倍和100倍之间稀释。通过至少三种 PBS 变化的温育来洗涤栅格。将栅格转移到用 BSA/PBS 稀释20分之一的二抗。我们使用与10nm (Sigma)偶联的抗大鼠 IgG。像步骤3那样洗,然后在蒸馏水中广泛地洗。让网格干燥,然后用电子显微镜检查。2022年利兹大学,利兹,LS29JT 条款和条件版权无障碍隐私和 Cookie

基于硝酸纤维素的免疫化学测定和免疫印刷免疫点测定/组织印刷方法概述通过用软铅笔仔细划线,在适当大小的硝酸纤维素膜(Schleicher & Schuell)上标出测定位点。我们使用5毫米 x 5毫米正方形。将1μl 溶于水或适当缓冲液中的试验化合物等分试样施加于硝化纤维素上,并晾干1小时。使用稀释级数是有用的。或者,制作切片植物材料的组织印刷或制作显示根系的印刷以研究多糖分泌物。用3% (w/v)乳蛋白在磷酸盐缓冲盐水(MP/PBS)中孵育1小时以阻断所有结合位点。在第一抗体中培养1.5小时。大鼠杂交瘤上清液在 MP/PBS 中稀释至少10倍。在大多数情况下,我们发现自来水可以作为 PBS 的合适替代品。将抗大鼠 IgG (全分子)与辣根过氧化物酶(HRP) Sigma) MP/PBS 中稀释1000倍的区域中孵育1.5小时。在 PBS 中大量洗涤。参见步骤4。通过在使用前立即制备的酶标记底物(例如 HRP 底物: 25ml 去离子水,含10mg/ml 4- -1-萘酚的5ml 甲醇,30μl6% (v/v)过氧化氢)中温育,确定抗体与硝化纤维素的结合。在使用前立即制备) ,并容许。当黑点出现在抗原位点时,通过在自来水中大量清洗来停止反应。微量滴定板法(ELISA)抗体捕获方法概述 ELISA 将用作固定抗原的样本调整至50mM 碳酸,pH9.6,浓度为 c.50 μg/ml。向微量滴定板的适当孔中加入100μl 抗原,并在4 °C ( RT 2小时)温育过夜。具有无抗原的孔对于确定无抗体结合的信号是有用的。用洗涤法去除含有抗原的溶液。用200μl/3% (w/v)牛血清白蛋白在磷酸盐缓冲盐水(BSA/PBS)中,在室温下或在4 °C 时用 O/N 封闭平板上的所有结合位点2小时。用 PBS 洗盘子。最容易做到这一点的方法是将盘子反复浸入装满 PBS 的托盘中,摇晃,然后强行将 PBS 扔出(扔进水槽)。这句话重复了十次。在我们的手中,自来水往往可以是一个合适的替代洗涤介质。在适当稀释的 BSA/PBS 中加入100μl/孔的一抗至少1.5小时。作为指导,将大鼠杂交瘤上清液稀释10倍,然后稀释510倍。按步骤5洗盘子15次。加入100μl/孔的第二抗体(例如抗大鼠 IgG (整个分子)偶联至辣根过氧化物酶(HRP) Sigma) ,在 BSA/PBS 中稀释1000倍。孵育至少1.5小时。按步骤5洗盘子15次。通过加入使用前立即制备的150μl/ HRP 底物(18ml 去离子水,2ml 1M 醋酸钠缓冲液 pH6.0,200μl 四甲基联苯,20μl 6% (v/v)过氧化氢)来确定抗体与平板的结合。加入50μl/孔的2.5 M 硫酸可停止显色。吸光度测定在450纳米在微板读数器。抗体滴定曲线图。A在第二种类型的竞争抑制 ELISA 中,抗原-抗体相互作用的定量*处于可溶性阶段。竞争抑制 ELISA 可以对所有抗原进行非常灵敏的定量分析。这是一个特别适合的技术,以测定抗体结合半抗原或小分子,不能有效地坚持微量滴定板。竞争抑制 ELISA 必须分两个步骤进行,如图 A 和图 B 所示。首先,使用抗体捕获 ELISA 和抗体针对恒定水平的固定抗原的滴定来确定抗体的工作稀释度(见上文和图1)。答)。在第二步中使用提供90% 最大结合力的抗体稀释法,因为在这种稀释法中,抗体结合对抑制作用最敏感。通过存在可溶性抗原或半抗原来抑制与固定化抗原结合的这种水平的抗体,如下所述和如下图所示费格。竞争抑制 ELISA 半抗原滴定曲线方法综述。用抗原(固定的抗原)包被微量滴定板并用 BSA/PBS 封闭。确定在抗体捕获 ELISA 中与该抗原最大结合的90% 的一级抗体稀释度(x)(参见上文和图1)。答)。在微量滴定板的适当孔中加入50μl/孔的连续稀释的可溶性抗原或 PBS 中的半抗原。作为指导,从2毫克/毫升开始,准备10倍稀释液。在 BSA/PBS 的第3步中,将50μl/孔的第一抗体以2倍的浓度加入到每个含有抗原的孔中。这将使抗原的最终浓度为1毫克/毫升(10倍稀释)和抗体浓度为 x。轻轻搅动微量滴定板以确保混合。至少培养1.5小时。用 PBS 洗盘子。最容易做到这一点的方法是将盘子反复浸入装满 PBS 的托盘中,摇晃,然后强行将 PBS 扔出(扔进水槽)。这至少重复了15次。在我们的手中,自来水往往可以是一个合适的替代洗涤介质。加入100μl/孔的第二抗体(例如抗大鼠 IgG (整个分子)偶联至辣根过氧化物酶(HRP) Sigma) ,在 BSA/PBS 中稀释1000倍。孵育至少1.5小时。执行上述抗体捕获 ELISA 方案中的步骤813。如图所示,确定抑制抗体结合所需的抗原浓度为50% B.这就是 IC50。通过比较一系列抗原的 IC50,可以很好地指示特定抗体识别这些抗原的程度。


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