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ForteBio试剂
产品时间:2022-08-07
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Octet® AHC2 生物传感器

96 个涂有抗人 IgG 的生物传感器托盘,用于对人 IgG IgG 衍生的 Fc 融合蛋白进行定量和动力学分析。5 托盘包装包括每托盘 10% 的折扣;20 盘盒包括每盘 20% 的折扣

用于含有人类 fc 区蛋白质的定量和动力学角色塑造的 Octet AHC2生物传感器

关键特征-含有粗制和纯化的人类 Fc 区域蛋白质的快速定量和动力学分析。改进生物传感器表面配体负载能力,提高动力学测定灵敏度,增加定量测定的动态范围。- 为多种动力学或定量测量进行高效率和成本效益高的生物传感器再生。

概述 Octet AHC2生物传感器是下一代抗人 IgG Fc 捕获生物传感器,通过启用人类 IgG 抗体和 IgG 衍生的 Fc 融合蛋白的定量和动力学角色塑造,提供显着改善的性能以及增加的通用性。此外,对于动力学和定量应用,Octet AHC2生物传感器可以高效和低成本地再生10-20次,这使得它们成为广泛的高通量应用的非常有用的解决方案,包括铅鉴定和优化,细胞系开发,工艺开发和 QC

动力学测定工作流程 Octet AHC2生物传感器用新的抗人 Fc 特异性抗体预固定,其能够直接从粗糙或纯化的基质中捕获人 IgG 和含人 Fc 区域的蛋白质。与上一代 AHC 生物传感器相比,它们提供了高达2倍的人 IgG 和含有 Fc 区域的蛋白质的结合能力,因此使得它们特别适合于高灵敏度的动力学测定,例如较小蛋白质的表征。图1中概述了一个利用 Octet AHC2生物传感器来表征分析物与人 IgG 之间相互作用的实例测定工作流程。图1: 人类 IgG 和分析物之间的相互作用的动力学角色塑造,使用的是 Octet AHC2生物传感器。(A)描述典型步骤的动力学分析工作流程: 1。平衡(基线) 2。负载(捕获) hIgG3。基线4。联合动力学,5。解离动力学解离动力学。(B)八重奏平台上配体 hIgG 与分析物 Fab 片段,山羊抗 hIgG (H + L)特异性(50kDa)之间相互作用的动力学分析。结合和解离痕迹符合1:1结合模型。动力学结果见表1。表1: 使用 Octet AHC2生物传感器进行配体 hIgG 和分析物 Fab 片段,山羊抗 hIgG (H + L)特异性(50kDa)之间相互作用的动力学结果,数据如图1B 所示。

定量分析工作流程八聚体 AHC2生物传感器根据蛋白质的 Fc 区与生物传感器表面结合的速率来确定抗体浓度。更具体地说,定量是通过将结合速率与标准校准曲线的结合速率进行比较来实现的,标准校准曲线是由具有已知浓度的相同的含有 Fc 的人蛋白质样品构建的。Octet AHC2生物传感器对所有四种 hIgG 亚类具有高度特异性,并且可以用于定量粗制和纯化的 hIgG,浓度范围为0.1 -2,000 μg/mL,取决于测定条件。确定的 IgG 浓度与使用正交技术( HPLC)产生的结果相关性良好。使用 Octet AHC2生物传感器产生的 hIgG 定量结果的示例如图2所示。图2: 使用 Octet AHC2生物传感器定量 hIgG(A)0.5 -2,000 μg/mL 动态范围内的浓度的 hIgG 剂量反应。(B)使用5PL (加权 Y2)拟合模型计算 hIgG 标准校准曲线。

通过标准的低 pH 方案,八聚体 AHC2生物传感器可以在动力学和定量测定中再生10-20个循环,最短时间为2分钟。再生允许生物传感器的重复使用,并提供了一个节省成本的解决方案来产生配体-分析物对的重复数据,或分析大量样品的顺序。具有10个再生周期的定量测定实例如图3和表2所示。

3: 使用10mM 甘氨酸,pH1.7.3应用范围 Octet AHC2生物传感器为广泛的应用提供了一个灵活的平台,从分析动力学(konkoff KD)或在含有人类 Fc 的蛋白质及其分析物之间进行表位分选,到在纯化的和粗蛋白质样品(例如上清液和血清)中定量含有人类 Fc 的蛋白质。

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