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bpsbioscience安徽代理
产品时间:2021-12-07
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CRISPR 产品和服务

CRISPR-Cas9 是一种用于基因组编辑的工具,已从细菌的先天免疫反应中改编而来。细菌捕获并存储来自入侵病毒或 DNA DNA 片段,该区域称为 CRISPR(成簇规则间隔短回文重复序列)阵列。该区域不断转录,产生短的 CRISPR RNA (crRNA) 引导序列,当它们检测到入侵病毒或与其互补的 DNA 时,结合并招募 Cas9CRISPR 相关蛋白 9)核酸酶,然后特异性切割入侵的DNA。这导致入侵的DNA降解,从而保护细胞。

CRISPR-Cas9 系统也经过修改,可用于哺乳动物细胞。通过在哺乳动物细胞中表达 Cas9 核酸酶并引入对我们感兴趣的基因特异的单一引导 RNA 序列 (sgRNA),我们可以将双链断裂引入细胞的基因组 DNA,以敲除或修改感兴趣的基因。

CRISPR 基因敲除

Cas9(化脓性链球菌CRISPR 相关蛋白 9)是一种核酸内切酶,当被 sgRNA(单向导 RNA)募集到特定 DNA 序列时,会在 DNA 中引入双链断裂。这种双链断裂最常在哺乳动物细胞中通过非同源末端连接 (NHEJ) 进行修复。

NHEJ 通常会导致切割位点的几个碱基对的缺失或插入,当导致移码时,会导致目标基因的功能失活或敲除。为了敲除您感兴趣的基因,BPS Biosciences 提供以下解决方案:

整合 sgRNA Cas9 敲除慢病毒

我们的 Cas9 慢病毒是无法复制的、基于 HIV VSV-G 假型慢病毒颗粒,可随时转导到几乎所有类型的哺乳动物细胞中,包括原代和非分裂细胞。这些颗粒包含一个由 EF1a 启动子驱动的 CRISPR/Cas9 基因,以及由 U6 启动子驱动的 4 个经验证的 sgRNA(单向导 RNA),靶向您感兴趣的基因。

我们的慢病毒到达时可直接转导——不需要其他组件——我们整合 sgRNA Cas9 慢病毒是快速生成敲除细胞系或细胞库的可靠方法;基因敲除效率可高达 90%,具体取决于基因和细胞类型。

非整合 sgRNA Cas9 敲除慢病毒

与我们的整合 sgRNA Cas9 慢病毒不同,我们的非整合慢病毒由突变的整合酶制成,导致 sgRNA Cas9 在您的目标细胞中仅瞬时表达。尽管与我们的整合慢病毒相比,这可能会导致较低的敲除效果(取决于您的基因和细胞类型),但非整合慢病毒消除了慢病毒随机整合到生理相关基因中的风险,并最大限度地减少了任何潜在的关闭如果 Cas9 稳定表达,可能会发生靶向。我们所有的慢病毒都经过验证并可以直接转导。

Cas9 表达细胞池

这些细胞库已经组成型表达 Cas9。要敲除您感兴趣的基因,您只需通过电穿孔或慢病毒转导传递您的基因特异性 sgRNA。这些价格实惠,可以成为设置您自己的敲除实验或筛选的经济高效的平台。

Cas9蛋白

我们的 Cas9 蛋白可用于体外切割分析,以比较和鉴定具有最高切割效率的 sgRNA

定制淘汰赛服务

借助 BPS Bioscience 的定制细胞系开发服务,我们经验丰富的科学家团队可以使用 CRISPR-Cas9 许可技术在 70 多种不同细胞类型中生成定制的敲除细胞系,针对您感兴趣的任何基因. 开发过程由单独的里程碑组成,其中在每个里程碑完成后提供数据。通过直接与您合作,每个项目都是针对所需的可交付成果进行定制的。联系我们以详细了解我们可以提供的服务。

CRISPR 敲入

Cas9 在细胞的基因组 DNA 中产生双链断裂时,哺乳动物细胞会通过非同源末端连接 (NHEJ) 或同源定向修复 (HDR) 进行修复。当细胞经历 HDR 时,我们可以提供替代模板,ssDNA 寡核苷酸或质粒供体,其中包含我们想要引入的基因突变(突变或标签),两侧是同源臂,细胞将使用它作为模板将这些变化复制并整合到基因组 DNA 中。

定制敲入服务

借助 BPS Bioscience 的定制细胞系开发服务,我们经验丰富的科学家团队可以使用 CRISPR-Cas9 许可技术在 70 多种不同细胞类型中生成定制的敲入细胞系,针对您感兴趣的任何基因. 开发过程由单独的里程碑组成,其中在每个里程碑完成后提供数据。通过直接与您合作,每个项目都是针对所需的可交付成果进行定制的。联系我们以详细了解我们可以提供的服务。

CRISPR激活

CRISPR 协同激活介质 (SAM) 系统用于诱导任何感兴趣基因的转录激活和表达。SAM 系统由 3 个组件组成:(1) 突变的 dCas9(化脓性链球菌CRISPR 相关蛋白 9),缺乏任何核酸内切酶活性,与转录激活因子 VP64 融合;(2) P65(转录因子p65,或核因子NF-κ-B p65)和HSF1(热激因子1)与MS2标签融合;(3) 带有 MS2 标签的 sgRNA,靶向目标基因的启动子区域。

一旦 sgRNA-MS2 靶向感兴趣基因的启动子区域,dCas9-VP64 MS2-P65-HSF1 就会被募集到基因组 DNA 中的位点并开始转录,从而诱导所需基因的表达。诱导可以超过一百倍,这取决于基因。

为了利用 SAM 系统诱导您感兴趣的基因表达,BPS Biosciences 提供以下解决方案:

CRISPR 激活 (CRISPRa) 细胞系

sgRNA-MS2 外,这些细胞系稳定表达激活您感兴趣的基因所需的所有成分。这些细胞表达突变的 dCas9(缺乏任何核酸内切酶活性)与 VP64、转录激活因子、P65(转录因子 p65,或核因子 NF-κ-B p65)和 HSF1(热休克因子 1)与 MS2 标签融合.

当这些细胞用 MS2 标记的 sgRNA 转导到您感兴趣的基因的启动子区域时,dCas9-VP64 MS2-P65-HSF1 被募集到基因组 DNA 中的位点并开始转录,诱导您所需基因的表达. 基因特异性 sgRNA-MS2 可以通过慢病毒转导或电穿孔传递。这些细胞系可以成为一个方便且经济高效的平台,用于设置您自己的激活实验或筛选,而无需首先选择表达 dCas9-VP64 MS2-P65-HSF1 的单细胞克隆,从而节省宝贵的时间。

整合 dCas9-VP64 MS2-P65-HSF1 慢病毒

我们的 Cas9 慢病毒是无法复制的、基于 HIV VSV-G 假型慢病毒颗粒,可随时转导到几乎所有类型的哺乳动物细胞中,包括原代细胞和非分裂细胞。这些颗粒包含 dCas9-VP64(具有杀稻瘟素抗性)和 MS2-P65-HSF1(具有潮霉素抗性)基因,可与 sgRNA-MS2 激活慢病毒结合使用,以生成您自己的 CRISPR 激活 (CRISPRa) 细胞系.

整合 sgRNA-MS2 激活慢病毒

这些慢病毒颗粒包含 4 个经过验证的 sgRNA(单向导 RNA),靶向目标基因的启动子区域,与 MS2 融合并由 U6 启动子驱动。这些慢病毒到达时可直接转导到您的 dCas9-VP64 P65-HSF1-MS2 表达细胞系中,以稳定激活您感兴趣的基因的表达。

sgRNA-MS2 激活质粒

虽然 Integrating sgRNA-MS2 慢病毒可用于生成稳定诱导感兴趣基因表达的细胞库或细胞系,但 sgRNA-MS2 质粒可以转染或电穿孔到您的细胞中以进行瞬时或稳定(在药物选择后)激活。这还为您提供了无病毒选项,具体取决于您的实验室环境或偏好。

自定义 CRISPR 激活 (CRISPRa) 服务

借助 BPS Bioscience 的定制细胞系开发服务,我们经验丰富的科学家团队可以使用 CRISPR-Cas9 许可技术在 70 多种不同细胞类型中生成定制的 CRISPR 激活细胞系,针对您感兴趣的任何基因。开发过程由单独的里程碑组成,其中在每个里程碑完成后提供数据。通过直接与您合作,每个项目都是针对所需的可交付成果进行定制的。联系我们以详细了解我们可以提供的服务。

CRISPR 屏幕

CRISPR 激酶敲除文库、阵列或池(即将推出!)

BPS Bioscience 正在构建一个针对人类激酶的 CRISPR 敲除文库,可提供阵列和混合格式。我们的整合慢病毒可直接转导到几乎所有类型的哺乳动物细胞中,包括原代细胞和非分裂细胞。除了适当的控制外,每种格式还包括每个基因 4 sgRNA。我们的阵列形式随时可用,以每孔一个基因的形式提供,无需任何高通量筛选平台或生物信息学分析。我们的混合形式以高滴度提供,并提供更便宜的替代方案,具体取决于您的筛选能力。

定制服务

借助 BPS Bioscience 的定制细胞系开发服务,我们经验丰富的科学家团队可以使用 CRISPR-Cas9 许可技术生成 CRISPR 文库,针对您感兴趣的任何感兴趣的基因。开发过程由单独的里程碑组成,其中数据在每个里程碑完成后提供。通过直接与您合作,每个项目都是针对所需的可交付成果进行定制的。联系我们以详细了解我们可以提供的服务。

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