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Moltox深圳代理
产品时间:2021-11-13
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简介由 bruce ames 博士和其他人在1970年代早期命名和开发,标准的“ ames 检测"是常用的安全评估和监管提交的检测方法之一。这种细菌反向突变试验的目的是通过测量一种化学品在几个细菌菌株的选定位点诱发反向突变的能力来评估其遗传毒性。它对多种诱变和致癌化学物质(1,2,3)敏感。这项简单、快速及廉价的测试,是多种产品(包括药物、医疗仪器、食物添加剂、工业化学品及除害剂)安全测试所需的基因毒性测试方法之一。

ames 试验"通过使用五个或更多的测试菌株来测量 dna 单碱基水平的遗传损伤。化验中使用的鼠伤寒沙门氏菌和大肠桿菌菌株都有一个*的突变,这个突变阻断了沙门氏菌或色氨酸生物合成的大肠杆菌中组氨酸的合成(4,5)。由于这些原始突变,细菌需要外源性组氨酸或色氨酸才能生存,如果没有这些必需营养素(营养缺陷) ,细菌就会饿死。检测的关键是细菌经历了一次补偿性突变,使基本基因重新开启(逆转) ,允许细胞在缺少组氨酸或色氨酸(原生营养物质)的情况下生长。每个菌株都是通过一种特定类型的突变产生的——要么是碱基对替换,要么是位移突变。由于反向、补偿性突变通常必须通过相同的诱变机制发生,机械毒理学信息也可以从 ames 试验结果中获得,该试验结果基于菌株的反向突变模式。

化学物质可以是直接作用的诱变剂,也可以通过代谢转化为诱变的形式。因此,包括amesassay在内的体外遗传毒理学分析都是在存在和不存在外源性代谢激活系统的情况下进行的。代谢激活系统包括大鼠肝脏匀浆(s9)和辅助因子的微粒体部分。在使用aroclor 1254 (aroclor)和苯甲酰黄酮混合物(pb bnf)加工前,诱导大鼠肝脏中的酶水平。标准Ames试验设计包括初步毒性试验或混合毒性和突变试验,然后是确定的突变试验。在毒性和突变试验中,试验菌株与s9混合物(s9激活条件下)或缓冲液(在非激活条件下)、试验品或对照品、微量组氨酸或色氨酸和熔融琼脂相结合。

这种细菌利用微量的组氨酸或色氨酸进行几次细胞分裂,但一旦用完就会停止生长,留下一个典型的“背景草坪",随着毒性的增加密度减小。48小时后,只有那些经历了逆向突变,重新启动必需基因的细胞,存活了下来,形成了突变菌落。计算背景草坪密度,然后计算复活菌落的数量。经济合作与发展组织(经合组织)是一个政府间组织,致力于协助各国政府,为经济、社会和治理方面的挑战提供指导。经济合作与发展组织建立了化学试验的指导方针,来评估化学试剂的安全性,包括药品。1997年,根据经合组织化学品检测指南,采用了 test 471: bacterial reverse mutation test。这个测试被推荐为基因毒性活性的初步筛选,特别是点突变诱导活性的筛选。点突变是许多人类遗传性疾病的原因,有大量证据表明点突变与人类和动物的肿瘤形成有关。(6)

需要 glp 基因毒性测试才能提交监管申请的药物和化学品的开发数量每年都在增加。同时,在产品开发的早期使用非 glp 遗传毒性测试来筛选候选人/补偿以便进一步开发的做法也在增加。成功的基因毒理学筛选测试需要能够预测全部 glp 研究的结果,这些研究最终将为规范提交而运行,保存测试物品,价格低廉,并且能够快速运行。为了满足这一不断扩大的市场需求,开发了 ames iiTM 检测方法。生物依赖性是提供这一重要检测方法的*位置。生物依赖专用性保持并已成为来自 bruce ames 的原始 ames 细菌株和在 bruceames 博士实验室开发的 ames ii 菌株(最初由 xenometrix 商业化)的正式分配点。Ames ii 技术由 bioreliance 在全球范围内授权,并在北美销售,包括特定服务和成套设备。

该方法的原理是作为遗传毒性筛选方法的第二代细菌反向突变法。这种检测方法是对传统的“ amesassay"方法的改进,由 bruce ames 博士在加州大学伯克利分校的实验室开发。传统的 ames 试验已经被修改,以允许该试验作为一种高通量筛选试验,需要非常少量的试验品。该方法是通过细胞生长来检测多个微孔中是否存在突变体。 ames ii 方法可以同时检测移码突变和外源(s9)代谢激活条件下的碱基对替换。用传统的 ta98沙门氏菌株检测到移码突变。利用6株鼠伤寒沙门氏菌特异性工程菌检测不同类型的碱基配对。每个菌株在组氨酸操纵子上都有一个不同的错义突变,这个操纵子被设计成能够*地还原为6种可能的碱基替换组合中的一种,这些碱基替换组合会引起碱基序列的转换或颠换。这六种菌株组合成一种单细胞培养物,叫做 tamix。与标准的沙门氏菌测试菌株相比,tamix 菌株具有较低的自发回复频率,这使得利用微量平板波动格式变得更加容易。两个菌株被镀成一式三份的384孔板。如果指示剂介质经历了从紫色到黄色的变化,或者在井中清楚地看到一个菌落,那么这些水井就被确定为回复剂

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