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R010B Takara全国代理
产品时间:2020-07-10
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PrimeSTAR HS DNA聚合酶

高保真PCR

 

PrimeSTAR HS DNA聚合酶是一种新型的高保真DNA聚合酶,可高效扩增大型DNA产物(人基因组DNA最gao8.5 kb;λDNA最gao22 kb)。由于强大的3'→5'核酸外切酶活性,其卓yue的校对能力可实现其出色的性能。抗体介导的热启动(HS)功能可提高特异性,从而减少背景,并证明在要求苛刻的克隆和测序应用中非常有用。PrimeSTAR HS  具有灵活方便的格式:

 

各个组件-Primeme HS HS  DNA聚合酶配有5X PrimeSTAR Buffer(含Mg 2+)试管和dNTPs管。

2X PCR预混液-包含PrimeSTAR HS DNA聚合酶,反应缓冲液和dNTP的预混液,用于简单方便的PCR设置和最少的移液步骤。

通过直接测序分析可以计算PrimeSTAR HS DNA聚合酶的保真度,与其他常用的间接表型分析(例如lacI)相比,可以提供对掺入错误率的更真实估计。由于固有的致死和沉默突变,其他酶供应商经常使用的计算方法(如lacI)容易出错。

 

PrimeSTAR HS DNA聚合酶因其极高的启动效率而还具有出色的扩增效率和快速的反应时间。使用仅5–15秒的短退火时间即可实现高特异性扩增。

 

对于最ju挑战性的PCR应用,PrimeSTAR HS的增强版本可轻松扩增富含GC的序列,甚至具有更高的保真度,并适用于长距离PCR:

 

具有GC缓冲液的PrimeSTAR HS可对最困难的富含GC的样品(75%或更高)提供可靠的高保真扩增。

PrimeSTAR Max产品提供了所有Takara Bio产品最gao的保真度和最kuai的扩展时间。

PrimeSTAR GXL产品具有高保真度,并具有扩增长且富含GC或AT的目标的能力。

 减

R010B     PrimeSTAR®HS DNA聚合酶      1,000伙 

一种高保真热启动(HS)PCR DNA聚合酶,由于其强大的3'至5'核酸外切酶活性而具有出色的校对能力。PrimeSTAR HS DNA聚合酶可有效扩增高达8.5 kb的人类基因组DNA靶标或22 kb的lambda DNA。酶随附了优化的缓冲液(Mg 2+加)和dNTP混合物的单独试管。猫。#R010B包含4个Cat。#R010A。请参考目录。#R010A了解完整的产品文档和资源。

R010A    PrimeSTAR®HS DNA聚合酶      250伙                  *     

一种高保真热启动(HS)PCR DNA聚合酶,由于其强大的3'至5'核酸外切酶活性而具有出色的校对能力。PrimeSTAR HS DNA聚合酶可有效扩增高达8.5 kb的人类基因组DNA靶标或22 kb的lambda DNA。酶随附了优化的缓冲液(Mg 2+加)和dNTP混合物的单独试管。

 

总览

高精度和强大的核酸外切酶活性,导致极低的错误率(每250 kb仅12个错误)

与标准Taq聚合酶相比,扩增效率更高

即使使用富含GC的模板也具有出色的性能

对变化的反应条件具有高度的耐受性(单个PCR循环方案可用于扩增大小不同的产物)

使用人类基因组DNA扩增靶标至8.5 kb,使用大肠杆菌基因组DNA 扩增靶标至10 kb,使用lambda DNA 扩增靶标至22 kb

由于提高了启动效率,反应时间短

热启动PCR酶可防止由于错误的引物或引物消化而在反应组装过程中发生错误的引发事件

更多信息

应用领域

高保真PCR

cDNA文库的扩增

用于蛋白质表达的cDNA克隆

定点诱变和突变基因分型(例如,SNP分析)

有关保真度比较的注意事项

我们使用测序分析来确定掺入错误率,因为大多数需要高保真扩增的研究人员都执行以下操作:PCR,克隆和测序。因此,通过直接序列分析确定错误率与大多数研究人员在自己的应用程序中使用的方法非常接近。请注意,使用不同保真度测量方法(例如,直接测序,Kunkel方法,Cline方法,lac I方法)获得的值不能直接产生可比数据。

 

纯度

将0.6 µg超螺旋pBR322 DNA或lambda DNA与10个单位的酶在74°C孵育1小时后,既未检测到切口,内切核酸酶,也未检测到核酸外切酶活性。

 

存储

运输和存放于–20°C。避免反复冻融和剧烈搅拌。解冻后,分配到PCR管中并储存在–20°C。

 

性能

使用λDNA(扩增的片段:8、10、12、15 kb)和人基因组DNA(扩增的片段:0.5、1、2、4、6、8 kb)作为模板,通过单片段PCR证实了酶促性能。

 

PCR产品

使用PrimeSTAR HS DNA聚合酶获得的大量PCR产物的末端会变钝。结果,PCR产物可以直接克隆到平末端载体中。如有必要,在克隆前将PCR产物磷酸化。

 

批量,自定义和OEM信息

如果您对批量购买,定制包装,定制配方(包括无甘油和高浓度)或合作机会感兴趣,请联系我们,以讨论您的需求或访问我们的OEM页面以提交查询。

 

其他产品信息

有关存储条件,产品组件和技术规格的信息,请参阅产品的分析证书。请参阅套件组件列表以确定套件组件。分析证书和试剂盒组件列表位于“文档”选项卡下。

 

3.0常见问题

3.1:PrimeSTAR™建议的退火条件是什么?

Takara建议以下退火条件:

初始退火温度应以55°C为起点。

退火时间:由于PrimeSTAR具有很高的灌注效率,因此将退火时间设置为5秒。或15秒

根据Tm值。较长的退火时间会导致涂污。

当Tm *> 55℃时:5秒。

当Tm * <55℃时:15秒。

使用以下方法计算Tm值:* Tm计算公式:Tm(°C)= 2(NA + NT)+ 4(NC + NG)-5

仅对<25个碱基的引物使用此方法。对于引物> 25个碱基,将退火温度设置为5秒。

注意:请按照提供的指导进行操作。

3.2:何时应使用3步与2步PCR循环方案?

通常,建议使用三步协议。但是,在琼脂糖上观察到产品涂抹时

凝胶电泳,或使用Tm> 70°C的引物时,建议使用两步操作方案。

3.3:琼脂糖凝胶电泳后,我观察到我的PCR产物有污迹。问题是什么?

通常在PCR条件不理想时会观察到PCR产物的涂片。尝试使用以下一项或多项建议来修改PCR循环条件:

-减少退火时间,例如如果以15秒进行退火,则将时间减少到5秒。

-将退火温度提高到58-65°C。

-从3步切换为2步循环协议。

3.4:我的PrimeSTAR™反应中获得的PCR产物数量很少,观察到很少或没有观察到

产品在我的琼脂糖凝胶上。如何增加产量?

通常,PCR产物量少是引物与DNA模板退火不正确的结果。尝试修改

您的退火条件:

-延长退火时间,例如如果执行退火5秒钟,则将时间延长到15秒钟,或者

将退火温度降至50-53°C。

3.5:PrimeSTAR™反应中建议的模板DNA推荐量是多少?

PrimeSTARTM反应中使用的模板DNA的合适量随DNA来源的不同而不同:

人类基因组DNA 5-500 ng

大肠杆菌基因组DNA 100 pg -100 ng

λDNA 10 pg-10 ng

质粒10 pg-1 ng

 

3.6 dNTPs的浓度可以修改吗?

过量的dNTP具有螯合作用,较高的dNTP浓度会降低反应混合物的有效Mg2 +浓度。随附的5X PrimeSTAR™缓冲液可提供1 mM的最终Mg2 +反应混合物最终浓度

优化后的dNTP最终浓度为200μM。因此,dNTP的浓度不应

被修改。

3.7:我的PrimeSTAR™产品的琼脂糖凝胶电泳应使用哪种缓冲液?

建议将TAE Buffer用于使用PrimeSTAR™获得的扩增产物的琼脂糖凝胶电泳

HS DNA聚合酶。使用TBE缓冲液可能会导致DNA条带模式在凝胶底部扩大。

3.8:PrimeSTAR™产生哪种类型的PCR产物末端?

用PrimeSTAR™HS DNA聚合酶扩增的所有PCR产物均具有平末端。因此,他们可以直接

可克隆到平端载体中(如有必要,可在克隆前进行磷酸化),但不能克隆到T载体中。

3.9:PrimeSTAR™产品在进行限制性酶切消化之前是否需要任何特殊处理?

在对扩增的PCR产物进行限制性酶切消化之前,通过苯酚/lv仿萃取从反应混合物中除去所有痕量的PrimeSTAR™HS聚合酶。特别是对于3'突出的限制酶,例如

Pst I,这些酶产生的3'突出末端,在消化过程中可能会被3'-5'核酸外切酶活性删除

剩余量的PrimeSTAR™HS聚合酶。

3.10:我可以在测序反应中直接使用PrimeSTAR™产品吗?

Takara建议在直接测序之前,先用酚/lv仿提取PCR产物,以确保灭活任何剩余的3'-5'核酸外切酶聚合酶活性

 

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