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Proteintech全国代理
产品时间:2020-05-18
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产品货号

产品名称

品牌

11422-1-AP

Marcksl Antibody

Proteintech

10934-1-ap

Cyclin D2 Antibody

proteintech

10586-1-AP

STMN2 Antibody

proteintech

MARCKSL1抗体1出版物

兔多克隆| 货号:11422-1-AP

物种特异性:人类,老鼠

在以下位置检测到正白平衡:人脑组织

在以下方面检测到阳性IHC:人肺癌组织,人肝癌组织,人胰腺癌组织

 

注意:建议使用pH 9.0的TE缓冲液进行抗原回收;(*)或者,可以用pH 6.0的柠檬酸盐缓冲液进行抗原修复

推荐稀释度:

白平衡:1:500-1:1000

IHC:1:20-1:200

取决于样品,在“验证”选项卡中检查数据

产品信息:

资源:兔子

纯化方法:抗原亲和纯化

同型:IgG抗体

存储:具有0.1%叠氮化na和50%甘油pH 7.3的PBS。储存于-20 Ô C. 等分是不必要的-20 ö下储存。

免疫原信息:

免疫原MARCKSL1融合蛋白Ag1967

全名:类马克1

计算分子量:195aa,20 kDa

观察分子量:48 kDa的

GenBank登录号:BC007904

基因编号(NCBI):65108

基因符号MARCKSL1

同义字F52,Mac MARCKS,MACMARCKS,MARCKS like 1,MARCKS like protein 1,MARCKS related protein,MARCKSL1,MLP,MLP1,MRP

背景 :

MARCKS样蛋白1(MARCKSL1)在神经组织中广泛表达,也称为MARCKS样蛋白(MLP)或MARCKS相关蛋白(MRP),属于MARCKS家族,它是PKC的高酸性豆蔻酰化家族底物广泛分布在包括巨噬细胞在内的各种细胞类型中。由于SDS凝胶上的异常迁移或磷酸化,该蛋白质的计算分子量为20 kDa,表观分子量为42-48 kDa。MARCKSL1的遗传破坏导致神经管闭合缺陷,依赖于肌动蛋白功能,细胞形状和细胞迁移的协调控制的事件。人们认为MARCKSL1调节肌动蛋白的细胞骨架,从而参与主要的细胞反应,例如吞噬作用,分泌,运动,有丝分裂和膜运输。

 

免疫印迹和免疫沉淀方案:

细胞裂解液的制备:

将RIPA缓冲液添加到细胞中(100μL放入35 mm皿中,200μL放入60 mm皿中,500μL加入100毫米培养皿),同时将培养皿置于冰上。刮擦细胞并轻轻摇动悬吊在冷藏室中的摇杆或定轨振动器上15分钟裂解细胞。用浴超声仪在冰水中超声处理,直至样品不再粘稠。在4℃下以12000 g的速度离心细胞5分钟以去除沉淀。移动上清液换一个新鲜的管。细胞裂解物的终浓度将为2-3μg/μL。对于白平衡,添加4×SDS档缓冲至裂解液至1×SDS终浓度。

免疫印迹:

1.煮沸10分钟后,将20-50μL样品上样至SDS PAGE。对于大多数蛋白质,建议每泳道上样量使用30-80μg总裂解物蛋白质,因为细胞中80%的蛋白质种类的浓度非常低。

2.将凝胶浸入蛋白质印迹转移缓冲液中。大多数情况下建议使用PVDF膜蛋白质。将膜浸入甲醇中1-2分钟,然后将膜浸入转移缓冲液10分钟,然后将其放在厚厚的缓冲液滤纸叠上。然后用另一叠浸有缓冲液的滤纸覆盖它。掩盖转移仪器。凝胶应在膜的负极。

3.以1 mA / cm2的电流运行90分钟。

4.将膜在封闭缓冲液中于室温下孵育1小时或过夜在4℃。用洗涤缓冲液洗涤膜3×5分钟。

5.用封闭缓冲液稀释一抗。在37℃下孵育膜1.5小时室内温度。用洗涤缓冲液洗涤膜3×5分钟。

6.用封闭缓冲液稀释二抗。在37℃下孵育膜1小时室内温度。用洗涤缓冲液洗涤膜3×5分钟。

7.用洗涤缓冲液洗涤膜3×10分钟。

8.用ECL显色。

免疫沉淀:

1.将200-350μL细胞裂解液(包含1-3 mg总蛋白)转移到微量离心管中。

2.向细胞(或预先清除的)裂解物中添加150-300μL孵育缓冲液和1-4μg一抗。最jia抗体浓度应通过滴定确定。用对照IgG建立阴性对照实验(对应于原发性抗体来源)。轻轻摇动在4℃下孵育2-4小时或过夜。

3.加入50μLProtein A或G Sepharose微珠浆液以捕获免疫复合物。将混合物在4℃轻轻摇动1-4小时。

4.取下端盖,从旋转柱底部释放上清液。必要时,重悬磁珠混合物以提高流速。

5.用含1x蛋白酶抑制剂的1x TBST将珠子洗涤5次。最后之后洗涤,将旋转柱在4℃下于500 g离心30秒,然后收集上清液并丢弃。

6.将离心柱放在新的微量离心管中,合并洗脱液。洗脱沉淀用40μl洗脱缓冲液在4℃下于8000-10000g离心1分钟,重复一次用新的40μl洗脱缓冲液洗脱。

7.在洗脱液中加入10μl碱中和缓冲液和30μl4×样品缓冲液,在95-100℃5分钟。将其保存在-20℃或在SDS-PAGE上加载20-40μl,并通过WB。

组织培养细胞免疫荧光的协议:

1.在小的圆形玻璃盖上培养细胞。

2.用4%PFA或有机溶剂在4℃固定细胞20分钟(如果您使用固定的有机溶剂,则只需跳过第3步,然后直接进行第4步)。

3.将玻璃杯准确转移5分钟至0.2%Ttiton X-100-PBS中。

4.在室温下用BSA-PBS封闭细胞1h,或在4℃下过夜。

5.在盖玻片上加入50μL特异性一抗,并在室温下孵育1小时在潮湿的容器中加热温度。用PBS清洗盖板三遍。

6.在每个盖玻片上加入50μL荧光标记的第二抗体,并在黑暗中于潮湿的容器中于室温下孵育1小时。

7.将盖玻片安装在15%的甘油中或少量载玻片上。

8.用指甲油在边缘上密封盖玻片。

石蜡包埋的组织切片的免疫组织化学方案:

1.在2种二甲苯中对载玻片进行脱蜡处理,一次40分钟,另一次20分钟。

2.将玻片转移到100%酒精,95%酒精,80%酒精,60%酒精和ddH2O中每次5分钟。

3.将载玻片放在装有抗原回收缓冲液的容器中,并在中间放置微波以进行操作。几分钟(700 W烤箱),让回收溶液在室温下冷却。

4.用TBS冲洗2×5分钟。

5.通过在3%H2O2溶液中孵育切片来阻断内源性过氧化物酶活性ddH2O 10分钟。

6.用TBS冲洗2×5分钟。

7.在室温下在TBS中封闭5-10%的山羊血清30分钟。

8.排干幻灯片几秒钟(请勿冲洗)并擦拭圆形部分。

9.应用在TBS中组成的一抗。在室温或4℃下孵育1小时过夜。

10.用TBST冲洗2×5分钟。

11.在室温下应用Envision二抗30分钟。

12.用TBS冲洗2×5分钟。

13.在室温下用发色团(DAB)显影,在显微镜下观察。

14.用自来水冲洗5分钟。

15.在市长的苏木浴中复染30-60秒。

16.在水浴中洗7-8次,然后自来水3分钟。

17.用60%,80%,95%和100%的酒精分别脱水5分钟。

18.转移到二甲苯中5分钟。通风30分钟。

19.安装

 

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